流感病毒感染后上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞通過(guò)模式識(shí)別受體識(shí)別流感病毒,通過(guò)釋放包括IFN-α和IFN-β在內(nèi)的I型干擾素和各種細(xì)胞因子,促進(jìn)固有免疫系統(tǒng)的抗病毒反應(yīng)。但是過(guò)度釋放的細(xì)胞因子可能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子風(fēng)暴,造成急性肺損傷。流感病毒感染所誘發(fā)的急性肺損傷被認(rèn)為與其誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素（尤其IFN-α）關(guān)系密切。IFN-α有多種亞型,人有13種,小鼠有14種。已有研究證明不同病毒感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-α亞型不相同,目前流感病毒感染中IFN-α亞型的表達(dá)差異尚不明確。為了探索IFN-α亞型在流感病毒感染中的差異性表達(dá),我們首先通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選IFN-α亞型;隨后使用體外流感病毒感染人和小鼠上皮細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞及流感病毒感染小鼠模型,檢測(cè)流感病毒感染后IFN-α亞型及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子m RNA的表達(dá)水平;最后克隆表達(dá)IFN-α21亞型重組蛋白,初步探究其生物學(xué)活性。本研究為流感病毒感染引發(fā)免疫損傷的防治提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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干擾素調(diào)節(jié)因子的激活和I型干擾素正反饋調(diào)節(jié)作用[53]

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文82.2.4IFN-α亞型的啟動(dòng)子分析使用GeneCopoeia（https://www.genecopoeia.com）獲取各IFN-α亞型啟動(dòng)子序列，并在啟動(dòng)子上找尋IRF、NF-κB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)序列，在啟動(dòng)子相應(yīng)位置進(jìn)行標(biāo)記。2.3結(jié)果2.3.1IFN-α亞型氨基酸序列及堿基序列比對(duì)由于人和小鼠的IFN-α都有多種亞型，我們分別對(duì)人和小鼠IFN-α亞型的氨基酸序列和編碼基因堿基序列比對(duì)。2.3.1.1人IFN-α亞型氨基酸序列及編碼基因堿基序列比對(duì)我們對(duì)人IFN-α亞型之間的氨基酸序列和編碼基因堿基序列分別進(jìn)行了比對(duì)，結(jié)果如下：（1）人IFN-α不同亞型之間的氨基酸序列比對(duì)為了確定IFN-α亞型之間的氨基酸序列是否存在差異，我們使用DNAMAN對(duì)人IFN-α各亞型氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)各IFN-α亞型的氨基酸同源性高達(dá)88.46%，其中已經(jīng)應(yīng)用于臨床的IFNA2型比較特殊，在第68位缺少一個(gè)甘氨酸（Glycine,G），其他各亞型的氨基酸序列無(wú)法完全區(qū)分（如圖2.1所示）。這說(shuō)明在蛋白質(zhì)水平上區(qū)分不同IFN-α亞型的表達(dá)情況是不可能的。圖2.1人IFN-α不同亞型氨基酸序列的比對(duì)結(jié)果Fig2.1ComparisonresultsofaminoacidsequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α（2）人IFN-α不同亞型編碼基因的堿基序列比對(duì)由于人IFN-α不同亞型氨基酸序列無(wú)法完全區(qū)分，因此，我們分析了IFN-α各亞型編碼基因的堿基序列。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：人IFN-α各亞型的編碼基因堿基序列的同源性更高，為93.45%。

第二章IFN-α亞型生物信息學(xué)分析9但當(dāng)對(duì)位置進(jìn)行比對(duì)時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)各亞型間的序列差異還是很大的（如圖2.2所示），連續(xù)超過(guò)20bp完全相同的序列只在第490-520的位置，其余序列均無(wú)法找到連續(xù)20bp以上完全相同的序列。這提示在mRNA水平上通過(guò)設(shè)計(jì)特定序列引物是可以區(qū)分不同IFN-α亞型的，這為后續(xù)以qRT-PCR分析不同IFN-α亞型的表達(dá)水平奠定了基矗圖2.2人IFN-α不同亞型編碼基因堿基序列的比對(duì)結(jié)果Fig2.2ComparisonresultsofbasesequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α2.3.1.2小鼠IFN-α亞型氨基酸序列及編碼基因堿基序列比對(duì)我們對(duì)小鼠IFN-α亞型之間的氨基酸序列和編碼基因堿基序列分別比對(duì)，結(jié)果如下：（1）小鼠IFN-α亞型氨基酸序列比對(duì)同上，我們對(duì)小鼠的IFN-α亞型的氨基酸序列也進(jìn)行了比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：小鼠IFN-α亞型氨基酸序列同源性為89.49%，其中Ifna4尤為特殊，在第19位氨基酸較其他亞型多一個(gè)丙氨酸（Alanine，A），第125至129位缺少五個(gè)氨基酸。其他各亞型的氨基酸序列無(wú)法完全區(qū)分（圖2.3）。這提示在蛋白質(zhì)水平上是無(wú)法區(qū)分小鼠IFN-α亞型的。


本文編號(hào)：2982639