犬細小病毒（canine parvovirus,CPV）病毒樣顆粒（virus-like particles,VLPs）是一種由犬細小病毒衣殼結(jié)構(gòu)蛋白組成的具有類似天然病毒粒子空間結(jié)構(gòu)的多聚體顆粒。犬細小病毒病毒樣顆粒因不含有病毒基因遺傳物質(zhì),而具有較好的免疫原性和安全性,能有效刺激機體產(chǎn)生良好的免疫反應(yīng)。近年來,利用CPV VP2蛋白獲得的病毒樣顆粒,不僅保持了VLP的免疫原性,而且能夠模擬CPV自然病毒粒子感染途徑,通過VP2蛋白與細胞表面特異受體的結(jié)合,實現(xiàn)CPV VLPs的靶向定位或載運。量子點（quantum dot,QD）以其獨有的熒光特性在生物成像方面具有良好的應(yīng)用潛力,但量子點生物相容性差、無靶向結(jié)合能力、對細胞和機體具有明顯的生物毒性,嚴重限制了量子點在生物學(xué)方面的廣泛應(yīng)用。本研究主要是利用PCR的方法將犬細小病毒的衣殼蛋白VP2基因擴增鏈接到pSMK載體質(zhì)粒上,借鑒大腸桿菌表達系統(tǒng)可溶性表達多種病毒樣顆粒的研究方法,得到可溶性的VP2蛋白,然后利用病毒衣殼蛋白自組裝成病毒樣顆粒特性。在體外環(huán)境下,以VLP為原料將MPA修飾后的量子點MPA-QDs包裹進入病毒樣顆粒內(nèi)... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 CPV VLPs的生物學(xué)特性
    2 CPV病毒樣顆粒的獲得
        2.1 真核表達系統(tǒng)獲得CPV VLPs
        2.2 原核細胞表達系統(tǒng)獲得CPV VLPs
    3 CPV VLPs的生物應(yīng)用
        3.1 CPV VLPs在病毒學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用
        3.2 CPV VLPs在疫苗研究中的應(yīng)用
        3.3 CPV VLPs作為生物載體的應(yīng)用
    4 量子點（QD）及其生物學(xué)應(yīng)用研究
    5 展望
第二章 犬細小病毒病毒樣顆粒包被量子點方法建立
    1 材料
        1.1 表達菌
        1.2 主要試劑及儀器
    2 方法
        2.1 CPV-VP2蛋白在大腸桿菌中的異源表達及純化
        2.2 體外組裝獲得CPV VLP
        2.3 油溶性CdSe/ZnS量子（QD）表面改性
        2.4 CPV VLP包被修飾后的量子點（MPA-QD）
        2.5 免疫印跡實驗（western bloting）
        2.6 表面電荷及粒子直徑檢測
    3 結(jié)果
        3.1 CPV VLP體外表達及組裝
        3.2 甲基丙烯酸修飾后的量子點（MPA-QD）
        3.3 CPV VLPs包被MPA-QD復(fù)合物的構(gòu)建結(jié)果
    4 討論
第三章 CPV VLP-QDs復(fù)合物性質(zhì)研究
    1 材料
        1.1 細胞
        1.2 主要試劑及儀器
    2 方法
        2.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
        2.2 CPV VLP-QD復(fù)合物的穩(wěn)定性分析
        2.3 CPV VLP-QD復(fù)合物的細胞毒性
        2.4 CPV VLP-QD復(fù)合物在細胞中的聚集情況
    3 結(jié)果
        3.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
        3.2 CPV VLP-QD復(fù)合物的穩(wěn)定性分析
        3.3 MTT毒性試驗
        3.4 免疫熒光觀察CPV VLP-QD在細胞內(nèi)的聚集分析
    4 討論
        4.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
        4.2 MTT毒性試驗
        4.3 免疫熒光觀察CPV VLP-QD在細胞內(nèi)的聚集分析
結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2979737