芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）是芍藥科芍藥屬多年生草本花卉,在我國栽培歷史悠久,是我國傳統(tǒng)名花之一。由于芍藥種子的上下胚軸雙重休眠特性,芍藥的育種和生產(chǎn)工作進(jìn)展比較緩慢,導(dǎo)致芍藥不能完全滿足觀賞花卉市場的需求。以芍藥雜交種子（母本為‘粉玉奴’,父本為‘粉玉樓’）為試驗(yàn)材料,克隆得到了差異表達(dá)基因Pl PP2Cs的全長,對(duì)Pl PP2Cs基因在芍藥種子萌發(fā)不同時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行分析,構(gòu)建植物表達(dá)載體并對(duì)野生型擬南芥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,通過抗生素篩選獲得具有抗性的擬南芥植株,并對(duì)其進(jìn)行PCR分子鑒定。本研究的結(jié)果如下:（1）根據(jù)課題組前期獲得的芍藥種子萌發(fā)過程的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選出差異表達(dá)基因Pl PP2Cs,克隆得到了該基因的全長。Pl PP2C1基因ORF序列全長為1236bp,編碼411個(gè)氨基酸。Pl PP2C2基因的ORF序列全長為1341bp,編碼447個(gè)氨基酸。通過構(gòu)建Pl PP2Cs蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹,得出Pl PP2C1與巨桉的PP2C蛋白之間親緣關(guān)系最近。Pl PP2C2與葡萄、藍(lán)果樹的PP2C之間親緣關(guān)系較近。Pl PP2C1和Pl PP2C2編碼的蛋白質(zhì)都... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

本研究的技術(shù)路線

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文191000bp→圖2-1芍藥種子總RNA的電泳檢測Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸脹前，2：吸脹后，3：露白，4：根長3-4cm，5：根莖變紅，6：長芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的檢測取10μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳結(jié)果表明，反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA均能擴(kuò)增出長度200bp左右，清晰明亮的條帶，且無拖尾等現(xiàn)象（圖2-2）。說明cDNA符合要求，可用于下一步試驗(yàn)。圖2-2芍藥種子cDNA的電泳檢測Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的獲得待PCR反應(yīng)完畢后，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果表明，擴(kuò)增出1200bp左右的條帶（圖2-3、圖2-4），對(duì)比分析可知與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中序列的長度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文191000bp→圖2-1芍藥種子總RNA的電泳檢測Fig.2-1ElectrophoreticdetectionoftotalRNAoftheseed注：1：吸脹前，2：吸脹后，3：露白，4：根長3-4cm，5：根莖變紅，6：長芽Note：1：Beforetheimbibition，2：Aftertheimbibition，3：Down-hypocotylgermination4：Rootlength3-4cm，5：Rhizomereddening，6：Up-epicotylgermination2.3.2反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的檢測取10μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳結(jié)果表明，反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA均能擴(kuò)增出長度200bp左右，清晰明亮的條帶，且無拖尾等現(xiàn)象（圖2-2）。說明cDNA符合要求，可用于下一步試驗(yàn)。圖2-2芍藥種子cDNA的電泳檢測Fig.2-2ElectrophoreticdetectionoftotalcDNAoftheseed注：M：DL2000Marker，1、2：cDNANote：M：DL2000Marker，1、2：cDNA2.3.3目的片段的獲得待PCR反應(yīng)完畢后，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果表明，擴(kuò)增出1200bp左右的條帶（圖2-3、圖2-4），對(duì)比分析可知與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中序列的長度基本一致。750bp→500bp→200bp→100bp→2000bp→M1228S→18S→123456


本文編號(hào)：2964050