發(fā)布時間：2021-01-01 14:29

　　目的初步探究線粒體靶向肽SS31對ARPE-19細(xì)胞的線粒體功能及凋亡的保護(hù)作用。方法用不同濃度的H₂O₂（0,100,150,200,250,300,500μmol/L）處理ARPE-19細(xì)胞24h,用MTT法檢測細(xì)胞活性并選擇最適濃度建立氧化損傷模型,再用不同濃度的SS31（10nM,100nM,1μmol/L）預(yù)處理細(xì)胞2h,通過MTT法測定細(xì)胞活力并選擇SS31的最佳保護(hù)濃度。在倒置相差顯微鏡下觀察ARPE-19細(xì)胞形態(tài)。在熒光顯微鏡下觀察ARPE-19細(xì)胞DAPI染色結(jié)果。通過Annexin-V/PI染色,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。用MitoSOX red探針染色細(xì)胞,在熒光顯微鏡檢測活性氧（ROS）的釋放水平。用DCFH-DA探針和流式細(xì)胞儀檢測ROS的釋放水平。用JC-1熒光探針和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化。用RT-PCR技術(shù)測定ARPE-19細(xì)胞凋亡相關(guān)基因（Bax,Caspase-3和Bcl-2）的表達(dá)水平,通過Real-time PCR技術(shù)測定這三種基因mRNA水平。使用單因素方差分析（ANOVA）方法,應(yīng)用... 

【文章來源】：西安醫(yī)學(xué)院陜西省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

不同濃度H2O2對ARPE-19細(xì)胞活性的影響

西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文28圖1A不同濃度H2O2對ARPE-19細(xì)胞活性的影響注:cellviability表示細(xì)胞活性，通過酶聯(lián)免疫檢測儀檢測不同H2O2濃度作用下的ARPE-19細(xì)胞活性，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。*表示與正常對照組比較，P＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,n=9。圖1B倒置相差顯微鏡下觀察ARPE-19細(xì)胞形態(tài)（×200）注：在倒置相差顯微鏡下觀察示，隨著H2O2濃度的增加，與空白對照組相比，ARPE-19細(xì)胞活細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，凋亡細(xì)胞數(shù)目逐漸增加，細(xì)胞形態(tài)趨于皺縮。3.2不同濃度SS31對ARPE-19細(xì)胞活性的影響及形態(tài)觀察使用不同濃度SS31（10nmol/L，100nmol/L，1μmol/L）預(yù)處理細(xì)胞2h后加入濃

西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文29度為200μmol/L的H2O2，用MTT法檢測SS31對細(xì)胞氧化損傷是否有保護(hù)作用以及SS31對細(xì)胞是否有毒性。如圖2A所示，單純SS31處理ARPE-19細(xì)胞后，細(xì)胞活性（86%±4.0）較空白對照組（89.3%±4.1）對比，無明顯差異，而經(jīng)過不同濃度的SS31預(yù)處理細(xì)胞2h后，與作用濃度為200μmol/L的H2O2組（67%±3.9）相比，可以看出隨著SS31濃度的升高，細(xì)胞的活性逐漸升高，依次為（71.9%±5.4）、（76.4%±3.3）、（82.2%±3.4），在SS31濃度為1μmol/L時，細(xì)胞活性較損傷組升高最為明顯。因此，選擇1μmol/L的SS31作為最佳保護(hù)濃度。各濃度保護(hù)組與H2O2組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，均用這一濃度處理細(xì)胞。如圖2B所示，隨著SS31濃度的升高，細(xì)胞凋亡數(shù)目逐漸減少，形態(tài)趨于正常，其中，濃度為1μmol/L的SS31組細(xì)胞形態(tài)改變較損傷組最為明顯。圖2A不同濃度SS31對H2O2濃度為200μmol/L作用下的細(xì)胞的活性的影響注:檢測不同濃度SS31預(yù)處理H2O2濃度為200μmol/L作用下的ARPE-19細(xì)胞的活性,結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。*表示與H2O2組比較,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,n=9。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂質(zhì)過氧化物臨床研究進(jìn)展[J]. 黃文杰,馬建林.  醫(yī)學(xué)新知雜志. 2019 (01)
[2]年齡相關(guān)性黃斑變性抗氧化劑治療進(jìn)展[J]. 危清泉,于靖.  眼科新進(jìn)展. 2017(08)
[3]氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡[J]. 廖永暉,湯雨,千年松,竇科峰.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2011(01)
[4]氧化損傷和老年性黃斑變性[J]. 王韌琰,鐘勇.  臨床眼科雜志. 2008(03)



本文編號：2951458