日本三角渦蟲（Dugesia japonica）隸屬扁形動物門（Platyhelminthes）,渦蟲綱（Turbellaria）,在動物系統(tǒng)演化中占有重要地位,并且具有極強的損傷修復及再生能力。但目前,其再生機制并不清楚。本文利用生物信息學、Real-time PCR、原位雜交和RNA干擾等技術(shù)對日本三角渦蟲轉(zhuǎn)錄組中表達量較高的熱休克蛋白70家族基因Djhsp70a、Djhsp70b、Djhsp70c、Djhsp70d進行了定量、定位和功能分析,結(jié)果如下:（1）首先對四基因進行溫度、切割損傷和離子液體應(yīng)激處理,結(jié)果表明:渦蟲在培養(yǎng)溫度低于或者高于20℃,切割損傷和離子液體處理應(yīng)激條件下,四基因表達量均明顯上調(diào)。（2）Djhsp70a生物信息學分析發(fā)現(xiàn):DjHSP70a蛋白是穩(wěn)定的親水性蛋白,具有多個磷酸化位點和糖基化位點,含有HSP70家族標簽3和末端高度保守的EEVD序列;整體原位雜交結(jié)果顯示:Djhsp70a基因在整體以及再生渦蟲中廣泛表達,其中整體渦蟲身體兩側(cè)有較強雜交信號,再生渦蟲芽基處有雜交信號且再生5d和7d時雜交信號最強;Djhsp70a基因干擾后,2/3整體渦蟲咽后部... 

【文章來源】：河南師范大學河南省

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 日本三角渦蟲概述
    1.2 渦蟲再生研究進展
    1.3 熱休克蛋白70的研究進展
        1.3.1 熱休克蛋白70的分類
        1.3.2 HSP70的結(jié)構(gòu)和生物學特征
        1.3.3 HSP70的生物學功能
    1.4 立題依據(jù)與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗材料的采集與培養(yǎng)
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗所用引物
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 日本三角渦蟲總RNA的提取與檢測
        2.2.2 一般反轉(zhuǎn)錄模板的制備
        2.2.3 Real-time-PCR模板的制備
        2.2.4 Real-time PCR擴增
        2.2.5 HSP70家族各目的基因的生物信息學分析及系統(tǒng)進化樹構(gòu)建
        2.2.6 應(yīng)激反應(yīng)過程中四目的基因的表達變化
        2.2.7 HSP70家族各目的基因的原位雜交
        2.2.8 HSP70家族各目的基因的RNA干擾
3 實驗結(jié)果
    3.1 cDNA模板的制備
        3.1.1 總RNA的提取
        3.1.2 反轉(zhuǎn)錄模板cDNA的檢測
    3.2 熱休克蛋白70家族四基因的生物信息學分析
        3.2.1 Djhsp70a基因生物信息學分析
        3.2.2 Djhsp70b基因生物信息學分析
        3.2.3 Djhsp70c基因生物信息學分析
        3.2.4 Djhsp70d基因的生物信息學分析
        3.2.5 HSP70家族四基因?qū)?yīng)蛋白質(zhì)的同源性和進化分析
    3.3 不同應(yīng)激條件下四基因的表達量變化
        3.3.1 不同溫度條件處理
        3.3.2 切割損傷處理
        3.3.3 不同濃度離子液體處理
    3.4 HSP70家族四基因的整體原位雜交結(jié)果
        3.4.1 Djhsp70a基因整體原位雜交結(jié)果
        3.4.2 Djhsp70b基因整體原位雜交結(jié)果
        3.4.3 Djhsp70c基因整體原位雜交結(jié)果
        3.4.4 Djhsp70d基因整體原位雜交結(jié)果
    3.5 四基因RNA干擾結(jié)果
        3.5.1 Djhsp70a基因RNA干擾結(jié)果
        3.5.2 Djhsp70b基因RNA干擾結(jié)果
        3.5.3 Djhsp70c基因RNA干擾結(jié)果
        3.5.4 Djhsp70d基因RNA干擾結(jié)果
4 討論
    4.1 四基因在應(yīng)激反應(yīng)中的保護作用
    4.2 四基因的結(jié)構(gòu)分析
    4.3 四基因的表達及功能分析
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文和參與的課題



本文編號：2930912