CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過(guò)程中產(chǎn)生的適應(yīng)性的免疫防御機(jī)制,用來(lái)保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破壞。CRISPR/Cas系統(tǒng)作為一套適應(yīng)性免疫系統(tǒng),應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)Cas蛋白識(shí)別入侵的外源基因組,并對(duì)其DNA進(jìn)行剪切。根據(jù)Cas蛋白的序列和結(jié)構(gòu)將CRISPR/Cas系統(tǒng)分為I型、II型和III型。其中I型和III型系統(tǒng)都需要多個(gè)Cas蛋白原件,而II型僅僅需要Cas9蛋白。II型CRISPR/Cas系統(tǒng)（即CRISPR/Cas9系統(tǒng)）已被發(fā)展成為一套理想的程序化的基因編輯工具。本文的主要目的是針對(duì)Foxp3基因設(shè)計(jì)靶位點(diǎn)gRNA,利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建靶向修飾載體系統(tǒng),對(duì)Foxp3基因位點(diǎn)進(jìn)行編輯,然后探討Foxp3的生物學(xué)功能,利用CRISPR將Foxp3基因敲除后,以Foxp3敲除細(xì)胞為研究對(duì)象,進(jìn)行各項(xiàng)生物學(xué)特性檢測(cè)。我們還將此技術(shù)應(yīng)用在腫瘤小鼠模型中,以期降低腫瘤細(xì)胞中的Foxp3基因的表達(dá),阻止Treg細(xì)胞的產(chǎn)生,抑制腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。本文使用的主要方法和結(jié)果:1、利用... 

【文章來(lái)源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PX458質(zhì)粒模式結(jié)構(gòu)圖

圖 2 酶切體系電泳結(jié)果re 2 Enzyme cleavage electrophoresisPX458 酶切電泳結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條帶泳條帶可用于膠回收實(shí)驗(yàn)。定

圖 2 酶切體系電泳結(jié)果igure 2 Enzyme cleavage electrophoresis result PX458 酶切電泳結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條帶清晰泳條帶可用于膠回收實(shí)驗(yàn)。定paⅠ和 EcoRV 處理載體質(zhì)粒，得到 4。1%瓊脂糖凝膠，設(shè)置 110 v 電壓，


本文編號(hào)：2928770