基于DNA的分析是眾多生物應(yīng)用的基礎(chǔ),然而,從環(huán)境基質(zhì)中或者生物樣品中分離出高純度的DNA是復(fù)雜且富有挑戰(zhàn)性的。傳統(tǒng)的DNA提取技術(shù)是采用酚-氯仿液液萃取,但該方法需要使用大量的有機(jī)溶劑,對人體健康有害。源自固相萃取技術(shù)的磁性固相萃取技術(shù)現(xiàn)已在DNA純化中得到應(yīng)用,磁性固相萃取集分離富集為一體,省去離心步驟,具有操作簡便,回收重復(fù)利用率高,能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。本研究基于磁性固相萃取技術(shù),制備了11種由不同胍鹽離子液體修飾的磁性殼聚糖-氧化石墨烯（Guanidinium ionic liquid modified-magnetic chitosan/graphene oxide,GIL-MCGO）復(fù)合納米材料,將其作為磁性吸附劑結(jié)合磁固相萃取技術(shù),對DNA進(jìn)行了純化分離。這些GIL-MCGO的直徑約為20納米,通過一塊普通的磁鐵,GIL-MCGO即可對單鏈DNA及鮭魚精子DNA鈉鹽進(jìn)行快速純化富集。本研究采用NanoDrop 2000分光光度計(jì)對所制備的11種GIL-MCGO的DNA提取率進(jìn)行了評估。通過單因素實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的研究了可能影響DNA提取的相關(guān)因素,如pH值、溫度、提取時(shí)間和離子強(qiáng)... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

磁性固相萃取流程圖

碩士學(xué)位論文10圖1-2胍鹽離子液體的化學(xué)結(jié)構(gòu)1.3.2胍鹽離子液體的性質(zhì)1.3.2.1熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性由于胍鹽陽離子含有三個(gè)氮原子能與其中心的碳原子共軛，因此具有高熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性。而胍鹽離子液體的熱失重溫度與其陰、陽離子的組成相關(guān)，除了少數(shù)酸性和硝酸鹽胍鹽離子液體熱失重的溫度較低，其他胍鹽離子液體的熱分解溫度大約在200-353℃之間[66]。通過利用胍鹽的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，胍鹽離子液體已經(jīng)被用作高溫條件下的一種催化劑[62]。1.3.2.2熔點(diǎn)低熔點(diǎn)的離子液體具有：陽離子低對稱性、弱分子間作用力、離子電荷分布均勻[67,68]。胍鹽離子液體所含陰、陽離子的種類和結(jié)構(gòu)影響著其熔點(diǎn)的高低。由于胍鹽陽離子具有三個(gè)氮原子能與中心碳原子形成共軛，正電荷分布在中心碳原子和三個(gè)氮原子上，使得不對稱烷基取代的胍鹽具有較低的熔點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，對于胍鹽離子液體的Tm/Tg值而言：環(huán)狀化合物＞鏈狀化合物，含氧化合物＞不含氧化合物；鏈狀胍鹽的熔點(diǎn)隨著烷基的大小而降低，如：正己基＞正丁基＞正辛基[66]。1.3.2.3密度胍鹽離子液體的密度大小與陰離子的體積、配位能力、陽離子的結(jié)構(gòu)和取代

胍鹽離子液體修飾的磁性納米材料純化生物樣品中的DNA25箱中。取200μL等份的人全血樣品與20μL蛋白酶k（20ugμL-1）混合，旋渦震蕩10秒，然后加入200μL緩沖液gA1，充分混合，混合物放入70℃水浴孵育15分鐘后，加入200μL無水乙醇輕柔混勻。將裂解液轉(zhuǎn)入中裝有GIL-MCGO的離心管中萃取10分鐘，用500μLBufferPW緩沖液預(yù)洗滌兩次，再用80％的乙醇洗滌一次后，取500μLpH=10的BR緩沖液（0.04mmolL-1）洗脫DNA，得到質(zhì)粒DNA溶液，用1.2％瓊脂糖電泳測試DNA的純度后，用于PCR擴(kuò)增。圖2-2磁性復(fù)合納米材料從復(fù)雜生物樣品基質(zhì)中提取DNA流程圖PCR程序：使用543bp的P53基因片段（引物序列見表2-3）進(jìn)行PCR。PCR混合物由2μL回收的DNA，2μL正向/反向引物（10umolL-1），25μL2×TaqPlusMasterMix組成，最終體積為50μL。PCR溫度程序?yàn)?5℃下反應(yīng)3分鐘，從90℃反應(yīng)15秒、57℃反應(yīng)20秒至72℃反應(yīng)1分鐘循環(huán)30次，最終在72℃延伸10分鐘。GIL-MCGO萃取DNA的流程圖如圖2-2所示：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2925436