狂犬病病毒糖蛋白、磷蛋白、基質(zhì)蛋白的真核表達(dá)及初步應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2020-12-15 05:42
狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies Virus,RABV）感染引起的一種人畜共患的急性傳染病。感染者發(fā)病后一旦出現(xiàn)顯著的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,幾乎100%死亡。狂犬病在發(fā)展中國(guó)家仍是對(duì)人類健康的嚴(yán)重威脅。目前對(duì)組成狂犬病病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白的功能及致病機(jī)理的研究仍不完全明確。掌握大量有關(guān)病毒蛋白與宿主蛋白相互作用的信息,將有助于揭示病毒在宿主上的致病過(guò)程的機(jī)制。然而,缺乏適宜的單克隆或多克隆抗體嚴(yán)重阻礙了我們的研究步伐,適用抗體的開(kāi)發(fā)已成為相關(guān)研究的先決條件。本研究首先對(duì)NCBI提供的RABV CVS毒株的三個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因的原始序列用JCAT軟件進(jìn)行密碼子優(yōu)化。根據(jù)對(duì)HEK密碼子的偏愛(ài),稀有密碼子被HEK偏愛(ài)密碼子代替,而不改變氨基酸序列,但還要考慮到GC含量以及避免被酶切水解等要素,最終盡可能地使用宿主偏愛(ài)的密碼子。合成的基因序列的5’和3’末端分別設(shè)計(jì)有BamHI和EcoRI消化位點(diǎn),并在5’末端引入了Flag標(biāo)簽,以方便后續(xù)的蛋白質(zhì)純化。在不表達(dá)冗余序列的情況下,在3’端引入了終止密碼子,并優(yōu)化了密碼子適應(yīng)指數(shù)（CAI）,以增加蛋白質(zhì)表達(dá)。經(jīng)DNAMAN軟件翻譯后,確認(rèn)氨基酸序列同源性為10...
【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
真核構(gòu)建RABV三種結(jié)構(gòu)蛋白的質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖
第二篇研究?jī)?nèi)容第一章狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白的基因序列優(yōu)化及表達(dá)結(jié)果23AAATTCCAATTGCTAGTCGAGGCCGACAAGCTAAGCAAAATCATGCAAGATGACTTGGAT|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||AAATTCCAACTGCTGGTGGAAGCAGATAAACTCTCCAAGATCATGCAGGACGACCTCGATKFQLLVEADKLSKIMQDDLDCGCTACACATCATGCTAA||||||||||||AGGTATACATCCTGTTAGRYTSC1.3.3pcDNA3.1-Flag-RABVG,M,N,P優(yōu)化前后密碼子適應(yīng)性分析結(jié)果研究表明，大量稀有密碼子是蛋白質(zhì)表達(dá)水平升高的重要原因。這樣的密碼子將阻礙核糖體的運(yùn)動(dòng)。因此，將降低表達(dá)宿主中外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平。用優(yōu)先密碼子替換稀有密碼子并改善mRNA穩(wěn)定性可以改善蛋白質(zhì)表達(dá)水平�；谶@樣的研究，密碼子被優(yōu)化以增加該基因在HEK中的表達(dá)水平。密碼子適應(yīng)指數(shù)（CAI）是指編碼區(qū)域中的密碼子與最佳密碼子使用頻率之間的對(duì)應(yīng)程度。取值范圍是01。取值越大，基因表達(dá)水平越高。從圖中可以看出，優(yōu)化后的CAI值明顯高于優(yōu)化前。RABVG未優(yōu)化密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.22參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.2RABVG序列未優(yōu)化的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.2RABVGUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence
第二篇研究?jī)?nèi)容第一章狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白的基因序列優(yōu)化及表達(dá)結(jié)果24RABVG優(yōu)化后密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.79參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.3RABVG序列優(yōu)化后的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.3RABVGcodonadaptationindexaftersequenceoptimizationRABVM未優(yōu)化密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.21參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.4RABVM序列未優(yōu)化的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.4RABVMUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence
本文編號(hào)：2917756
【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
真核構(gòu)建RABV三種結(jié)構(gòu)蛋白的質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖
第二篇研究?jī)?nèi)容第一章狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白的基因序列優(yōu)化及表達(dá)結(jié)果23AAATTCCAATTGCTAGTCGAGGCCGACAAGCTAAGCAAAATCATGCAAGATGACTTGGAT|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||AAATTCCAACTGCTGGTGGAAGCAGATAAACTCTCCAAGATCATGCAGGACGACCTCGATKFQLLVEADKLSKIMQDDLDCGCTACACATCATGCTAA||||||||||||AGGTATACATCCTGTTAGRYTSC1.3.3pcDNA3.1-Flag-RABVG,M,N,P優(yōu)化前后密碼子適應(yīng)性分析結(jié)果研究表明，大量稀有密碼子是蛋白質(zhì)表達(dá)水平升高的重要原因。這樣的密碼子將阻礙核糖體的運(yùn)動(dòng)。因此，將降低表達(dá)宿主中外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平。用優(yōu)先密碼子替換稀有密碼子并改善mRNA穩(wěn)定性可以改善蛋白質(zhì)表達(dá)水平�；谶@樣的研究，密碼子被優(yōu)化以增加該基因在HEK中的表達(dá)水平。密碼子適應(yīng)指數(shù)（CAI）是指編碼區(qū)域中的密碼子與最佳密碼子使用頻率之間的對(duì)應(yīng)程度。取值范圍是01。取值越大，基因表達(dá)水平越高。從圖中可以看出，優(yōu)化后的CAI值明顯高于優(yōu)化前。RABVG未優(yōu)化密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.22參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.2RABVG序列未優(yōu)化的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.2RABVGUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence
第二篇研究?jī)?nèi)容第一章狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白的基因序列優(yōu)化及表達(dá)結(jié)果24RABVG優(yōu)化后密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.79參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.3RABVG序列優(yōu)化后的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.3RABVGcodonadaptationindexaftersequenceoptimizationRABVM未優(yōu)化密碼子適應(yīng)指數(shù)：0.21參考組：Homosapiens(Mamalian/HEK)密碼子使用頻率表圖1.4RABVM序列未優(yōu)化的密碼子適應(yīng)指數(shù)Figure1.4RABVMUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence
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