發(fā)布時(shí)間：2020-10-23 08:59

　　 海洋中生活著物種豐富的微生物。海洋環(huán)境下生活的微生物與陸地微生物所產(chǎn)的胞外多糖在很多方面有很大差別。海洋微生物所產(chǎn)胞外多糖具有結(jié)構(gòu)新穎及生物活性多樣等特點(diǎn)。因此,在醫(yī)藥和食品等行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用,具有很大的商業(yè)開(kāi)發(fā)價(jià)值。本文以一株紅樹(shù)林來(lái)源真菌和兩株深海來(lái)源放線菌所產(chǎn)水溶性胞外多糖作為研究對(duì)象,利用色譜分離技術(shù)分離純化多糖,采用化學(xué)方法和現(xiàn)代波譜分析技術(shù)研究多糖的結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果如下：1.從海南文昌地區(qū)紅樹(shù)林根泥真菌Aspergillus sp.oucmdz-1914發(fā)酵液中提取得到多糖粗品ouc,依次用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析和Sephacryl S-100凝膠過(guò)濾層析法分離和純化得到ouc-1、ouc-2、ouc-3和ouc-4四種多糖組分�；瘜W(xué)分析表明,四種多糖組分的總糖含量均在90%以上,蛋白含量均較低,除ouc-1外其他三種多糖組分中均含有少量氨基糖。PMP柱前衍生高效液相色譜和高效凝膠滲透色譜分析表明,ouc-1、ouc-2、ouc-3和ouc-4單糖組成均以Man為主,還含有少量的Glc和Gal,ouc-2、ouc-3口ouc-4含有少量的GlcN:四種多糖的分子量分別為2.9 kDa.4.26 kDa.3.7 kDa和4.1 kDa。多糖ouc-2、ouc-3和ouc-4經(jīng)甲基化衍生后進(jìn)行GC-MS分析以判斷糖苷鍵連接方式,結(jié)果表明,ouc-2. ouc-3和ouc-4單糖連接方式主要為Manp(1→、→2)Manp(1→、→3)Manp(1→、 →6)Man9(1→和→2,6)Manp(1→,ouc→3中還含有Galf(1→和→4)Glcp(1→,ouc→4含有少量的→4)Glcp(1→。2.從南海深海海泥放線菌oucmdz-2984和南大西洋中脊深海泥樣放線菌oucmdz-3763的發(fā)酵液中分別提取得到兩種多糖粗品MDZ和SH,用Q-Sepharose Fast Flow離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠過(guò)濾層析柱分離和純化兩種多糖粗品,從MDZ中分離得到兩種多糖mdz-1和mdz-2。PMP柱前衍生高效液相色譜分析表明,mdz-1主要含有Man,還含有少量的GlcN、Glc、Gal、 Xly、Ara和Fuc;mdz-2主要含有Glc、GlcN和GlcUA,還含有少量的Man、 Gal、Ara和Fuc。高效凝膠滲透色譜分析表明,mdz-1和mdz-2分子量分別為4.88 kDa和4.65 kDa。從SH粗多糖中分離得到sh-11、sh-12和sh-2三種多糖組分,用PMP-HPLC法檢測(cè)多糖的單糖組成,高效凝膠滲透色譜法測(cè)定分子量,甲基化分析多糖中單糖的連接方式。結(jié)果表明,多糖sh-11主要含有Ara,還有少量Glc和Gal,分子量為9.1 kDa, sh-11中主要含有Araf(1→、→4)Arap(1→、 Galp(1→和-4)Glcp(1→四種連接片段;多糖sh-12含有Glc.Gal和Ara三種單糖,分子量為2.21 kDa,含有的連接方式有Glcp(1→、→2)Arap(1→、 →2)GalP(1→、→4)GaIp(1→、→4)Glcp(1→\→)Arap(1→和→3,4)Arap(1→,連接方式種類(lèi)較多；多糖sh-2中主要含有Glc,分子量為5.08 kDa。甲基化和核磁共振波譜分析表明,sh-2的連接方式主要為→6)Glcp(1→,還含有少量的Glcp(1→、→2)Glcp(1→和→2,6)G1cp(1→。本論文的研究為“海洋糖庫(kù)”的建設(shè)提供了新穎的海洋微生物胞外多糖,為藥物篩選提供了新的多糖。
【學(xué)位單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：Q936
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1. 微生物多糖的研究歷程及現(xiàn)狀
        1.1 微生物多糖簡(jiǎn)介
        1.2 微生物多糖的應(yīng)用
        1.3 微生物多糖的合成
    2. 海洋微生物胞外多糖的研究現(xiàn)狀
        2.1 紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)中微生物多糖的研究
        2.2 極端環(huán)境下微生物產(chǎn)胞外多糖研究
            2.2.1 南極海洋微生物產(chǎn)胞外多糖的研究
            2.2.2 深海熱液口和海水沉積物中微生物產(chǎn)胞外多糖的研究
    3. 微生物胞外多糖結(jié)構(gòu)研究
        3.1 微生物多糖的提取分離方法
            3.1.1 微生物胞外多糖的提取
            3.1.2 微生物胞外多糖的分離純化
        3.2 微生物多糖結(jié)構(gòu)分析力法
        3.3 微生物多糖的活性研究
            3.3.1 微生物多糖的免疫調(diào)節(jié)作用
            3.3.2 微生物多糖的抗腫瘤活性
            3.3.2 微生物多糖抗氧化活性
    4. 本課題的研究背景及意義
第一章 紅樹(shù)林根泥真菌ASPERGILLUS SP.OUCMDZ-1914胞外多糖分離純化和結(jié)構(gòu)研究
    引言
    1. 材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)原料
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和材料
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 胞外多糖粗品的提取方法
        2.2 胞外多糖的分離純化方法
            2.2.1 離子交換柱層析分離
            2.2.2 凝膠滲透柱層析
        2.3 理化性質(zhì)分析方法
            2.3.1 總糖含量測(cè)定方法
            2.3.2 蛋白含量測(cè)定方法
            2.3.3 氨基糖含量測(cè)定方法
        2.4 多糖的純度分析和分子量測(cè)定方法
        2.5 單糖組成分析方法
        2.6 紅外光譜分析
        2.7 甲基化分析方法
            2.7.1 試劑與樣品的預(yù)處理
            2.7.2 甲基化反應(yīng)
            2.7.3 甲基化產(chǎn)物的酸水解
            2.7.4 水解產(chǎn)物的還原
            2.7.5 還原樣品的乙酰化
            2.7.6 GC-MS分析方法
    3. 結(jié)果與討論
        3.1 胞外多糖的提取及分離
        3.2 胞外多糖的純化
        3.3 胞外多糖的化學(xué)組成分析
        3.4 胞外多糖的純度和分子量
        3.5 胞外多糖的單糖組成分析
        3.6 胞外多糖的紅外光譜
        3.7 純品多糖的甲基化結(jié)果分析
    4. 本章小結(jié)
第二章 兩株深海來(lái)源放線菌胞外多糖分離純化和結(jié)構(gòu)研究
    引言
    1. 材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)原料
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和材料
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 胞外多糖粗品的提取方法
        2.2 胞外多糖的分離純化方法
        2.3 胞外多糖化學(xué)組成分析
        2.4 純度和分子量分析
        2.5 單糖組成分析
        2.6 紅外光譜分析
        2.7 甲基化分析方法
        2.8 核磁共振波譜（NMR）分析
    3. 結(jié)果與討論
        3.1 胞外多糖的提取及分離
        3.2 胞外多糖的純化
        3.3 胞外多糖的化學(xué)組成分析
        3.4 胞外多糖的純度和分子量
        3.5 胞外多糖的單糖組成分析
        3.6 胞外多糖的甲基化分析結(jié)果
        3.7 核磁結(jié)果分析
    4. 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
結(jié)語(yǔ)
致謝
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