【摘要】：禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)感染禽類后引起的一種疾病綜合征,包括呼吸道、消化道、產(chǎn)蛋量下降或免疫抑制等疾病,可分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無致病性禽流感三類。雖然H9N2亞型禽流感病毒屬于低致病性禽流感,但疫病在我國廣泛流行,且還發(fā)生了多起感染人的事件。由于H9N2禽流感病毒具有頻繁變異與重組的特性,不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,同時也嚴(yán)重威脅著人類的生命安全。預(yù)防和控制禽流感最有效的手段就是接種疫苗,目前國內(nèi)比較常見的用來制備H9N2亞型禽流感的疫苗株主要是A/Chicken/Shanghai/F/98(F株)與A/Chicken/Shanghai/6/96等。這些毒株均是08年之前分離的,與現(xiàn)在流行株的抗原性差異非常大,因而疫苗急需升級換代。本試驗(yàn)從2013年在浙江、安徽、安徽等地活禽市場所采樣品中分離獲得8個H9 AIV分離株。這些H9N2禽流感毒株通過10倍稀釋,分別經(jīng)接種雞胚尿囊腔接種,最后取尿囊液血凝效價最高的進(jìn)行下一輪的純化。三次純化后,收集最高稀釋度和血凝效價的雞胚尿囊液,存放于-80度冰箱。通過雞胚尿囊RNA的提取后,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄、PCR等獲得所需要的目的基因片段(其中PB2、 PB1、PA、HA、NP基因分成兩段擴(kuò)增)。PCR產(chǎn)物割膠回收并純化,并送上海美吉公司進(jìn)行測序。序列測定完成后用DNAstar軟件中的SeqMan程序進(jìn)行序列拼接、用MegAlign程序?qū)ζ唇雍蟮男蛄行蛄羞M(jìn)行同源性分析。并用Mega6軟件繪制進(jìn)化樹,分析不同年份、不同地域的H9N2亞型AIV流行毒株的遺傳進(jìn)化。結(jié)果表明：這8株分離株它們之間的HA基因的同源性為95.7-100%,氨基酸的同源性為96.4-99.8%,NA的核苷酸同源性在93.7%-99.8%之間,氨基酸的的同源性為93.1%-99.8%,NS的核苷酸同源性為95.3%-100%,M的核苷酸同源性為98.2%-100%、NP的核苷酸同源性為95.3%-100%、PA的核苷酸同源性為97.2%-100%、PB1的核苷酸同源性為96.1%-100%、PB2的核苷酸同源性為96.1%-100%。遺傳進(jìn)化分析結(jié)果表明,這8株H9N2亞型禽流感病毒株的HA、NA、 NS、M、NP、PA、PB1、PB2基因均屬于同一亞系分支,具有較高的同一性。但這些H9N2 AIV與之前的疫苗毒(F株)的HA基因的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn),不在同一分支上。結(jié)論：現(xiàn)在的H9N2 AIV流行株在抗原性方面較為一致,但與過去毒株的抗原性相差甚遠(yuǎn)；這些H9N2 AIV流行株的獲得,為新的H9 AIV疫苗研制奠定了毒株的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：2768557