發(fā)布時間：2020-07-07 17:20

【摘要】：鼠傷寒沙門氏菌rfbN基因編碼的蛋白為合成0-抗原的鼠李糖轉(zhuǎn)移酶,它負責轉(zhuǎn)運鼠李糖。我們構(gòu)建了鼠傷寒沙門氏菌rfbN基因缺失株以及阿拉伯糖調(diào)控rfbN基因表達的突變株,并對其進行生物學特性的初步研究,主要內(nèi)容可歸納如下：1鼠傷寒沙門氏菌rfbN基因缺失株的構(gòu)建鼠傷寒沙門氏菌rfbN基因大小945bp,我們構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒pYA4286-ΔrfbN,利用自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組方法,構(gòu)建了rfbN基因缺失株。LPS圖譜顯示,ArfbN缺失株沒有完整的LPS,其LPS結(jié)構(gòu)包括類脂A、核心多糖和一個半乳糖。我們構(gòu)建了15a-rfbN回補質(zhì)粒,將其電轉(zhuǎn)化入ΔrfbN缺失株,LPS圖譜顯示,15a-rfbN回補質(zhì)粒能夠恢復(fù)ΔrfbN缺失株的LPS結(jié)構(gòu),表明成功構(gòu)建rfbN基因缺失株。2鼠傷寒沙門氏菌阿拉伯糖調(diào)控rfbN基因突變株的構(gòu)建我們通過改造rfbN基因的SD序列和起始密碼子,構(gòu)建了重組自殺性質(zhì)粒pYA4286-ApagL-TT araC PBADrfbN,利用自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組方法,構(gòu)建了兩株阿拉伯糖調(diào)控rfbN基因表達的突變株:ΔrfbNΔpagL::TT araC PBADrfbN(起始密碼子ATG)和ΔrfbNΔpagL::TT araC PBADrfbN(起始密碼子GTG)。在有阿拉伯糖存在條件下,ArfbNApagL::TT araC PBADrfbN(起始密碼子ATG)突變株,調(diào)控表達rfbN基因,使細菌能夠合成完整的LPS；而沒有阿拉伯糖的條件下,rfbN基因不表達,其LPS表型與ΔrfbN株相同。然而,在有阿拉伯糖存在條件下,ΔrfbNΔpagL:;TT araC PBADrfbN(起始密碼子GTG)突變株,rfbN基因少量表達,細菌沒有完全恢復(fù)LPS結(jié)構(gòu)。3鼠傷寒沙門氏菌突變株生物學特性研究為了解析rfbN基因?qū)κ髠抽T氏菌生物學特性的影響,我們系統(tǒng)地比較了突變株與野生株在生長曲線、泳動與群集、對多粘菌素B的抵抗力、粘附與入侵及毒力這幾個方面的差異。結(jié)果表明,ArfbN缺失株與ΔrfbNApagL::TT araC PBADrfbN(起始密碼子ATG)突變株在體外生長曲線、細胞粘附率、細胞入侵率與野生株無顯著性差異。相比之下,rfbN基因缺失后,菌株的泳動和群集能力顯著下降(P0.001),在多粘菌素B作用下的存活率顯著下降(P0.001),毒力下降。同時,在阿拉伯糖存在條件下,△rfbNΔpagL:TT araC PBADrfbN(起始密碼子ATG)突變株的泳動和群集能力得到提升,而完全恢復(fù)對多粘菌素B的抵抗力。綜上所述,我們證實,rfbN基因的缺失對鼠傷寒沙門氏菌的體外繁殖、粘附與入侵沒有影響,卻能顯著降低細菌的毒力和對生物活性物質(zhì)的抵抗力。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61

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