【摘要】：流感病毒是一種囊膜病毒,各組分在細胞質(zhì)膜組裝并以出芽形式釋放病毒。之前有報道顯示M1蛋白無法單獨出芽,必須與表面蛋白相互作用被攜帶出芽,而相互作用的區(qū)域和這種相互作用如何影響病毒粒子的出芽尚不清楚。這里我們利用雙分子熒光互補實驗和體外病毒出芽實驗對以上問題進行了如下研究:1.將病毒A/WSN/1933(H1N1)感染擴增于MDCK細胞,提取病毒RNA并反轉(zhuǎn)錄cDNA,以cDNA為模板PCR擴增得到NA和M1及其各截段基因片段。將所得基因片段分別克隆入BIFC工作載體和Flag、ha真核表達載體。2.利用雙分子熒光互補實驗對M1和NA的相互作用進行了研究,轉(zhuǎn)染于293T細胞的VC-M1與VN-NA可產(chǎn)生較強熒光信號,說明二者間存在互作。體外出芽實驗證實NA蛋白能夠獨立出芽,M1蛋白無法獨立出芽,而M1蛋白可以與NA蛋白相互作用并被攜帶共同出芽。3.利用雙分子熒光互補實驗和體外出芽實驗確定M1蛋白與NA蛋白相互作用的區(qū)域,結(jié)果表明M1蛋白N端完整的160個氨基酸是與NA的互作區(qū)域,60～252aa不參與互作。4.對M1蛋白1～160aa區(qū)域兩端分別缺失20aa會降低其在細胞中的表達量,表明M1蛋白N端160aa對其蛋白穩(wěn)定性起關(guān)鍵作用。與此同時,對M1蛋白的晶體結(jié)構(gòu)分析也證實了其1～160aa對維持蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要性。本研究探明了 M1蛋白和NA蛋白的相互作用區(qū)域并揭示這種相互作用對對病毒出芽的影響,進一步完善了流感病毒的出芽機制。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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本文編號：2740186