發(fā)布時間：2020-07-02 18:52

【摘要】：兔病毒性出血癥(Rabbit hemorrhagic disease, RHD)又稱兔瘟,是一種能夠引起家兔出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀以及快速死亡的一種急性高致病性傳染病。兔群一旦感染,發(fā)病率和死亡率均可高達100%,是嚴重影響?zhàn)B兔業(yè)健康發(fā)展的重要兔病之一。本研究根據(jù)已發(fā)表RHDV基因組序列,針對VP60基因前900 bp片段(AB區(qū))設計兩條表達引物,通過RT-PCR擴增、酶切、連接轉化構建重組表達質(zhì)粒pCold TF-VP60,轉化到BL21感受態(tài)細胞中,挑取陽性菌擴大培養(yǎng),用IPTG (1mmol/L)進行誘導表達和條件優(yōu)化,收集誘導表達菌體進行SDS-PAGE分析和Western-blotting鑒定,并進行重組蛋白的Ni-TED親和層析法純化和其反應原性ELISA檢測。結果構建的重組表達質(zhì)粒pCold TF-VP60在濃度為lmmol/L IPTG,誘導表達3-4h可獲得約85.3 kD大小重組蛋白,表達重組蛋白的間接ELISA結果表明表達的重組蛋白能與免疫陽性RHDV抗體特異性結合特性,具有良好的反應活性。以羊抗兔IgG和鼠抗重組蛋白IgG分別標記T線和C線設計RHDV抗體檢測試紙條,通過膠體金的制備、重組VP60蛋白標記、鼠源重組VP60抗體的制備,T線和C線蛋白用量的優(yōu)化,特異性和敏感性實驗,初步試制了可用于兔抗RHDV抗體檢測的免疫膠體金試紙條,結果顯示研制的膠體金試紙條具有良好的靈敏性和特異性,其免疫血清靈敏度可達到1：16；除了兔抗RHDV血清的檢測線出現(xiàn)紅色條帶外,其他陰性血清、兔抗巴氏桿菌血清和PBS液檢測線均無顯色條帶,為RHDV的防控提供了一種新的檢測技術。
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 馬力;楊麗梅;王艷;郭時金;沈志強;張穎;;兔瘟病毒VP60蛋白原核表達及其應用[J];家畜生態(tài)學報;2013年05期

2 魯忠祥;耿毅;汪開毓;坤清芳;鄧夢玲;鄧釗彬;余韜;陳成;;兔瘟病毒VP60基因重組真核表達質(zhì)粒的構建及其免疫原性[J];中國獸醫(yī)學報;2015年12期

3 李云琴;趙美盈;刁富花;;兔病毒性出血癥病毒重組蛋白VP60間接ELISA抗體檢測方法的建立與應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年07期

4 唐世云;武玉香;莊金秋;郭廣君;王玉茂;;兔瘟抗體檢測卡的研究及應用[J];中國動物保健;2018年02期

5 任銳;丁士杰;孫玉偉;任清丹;董美英;劉沂霖;;1例兔瘟的診治[J];養(yǎng)殖與飼料;2018年09期

6 劉杰濤;孟彥淼;;兔瘟的新特點與防治措施[J];農(nóng)村百事通;2017年01期

7 靳巍;劉峰;任銳;孫營;邵洪澤;丁世杰;;兔瘟常用檢測方法[J];吉林畜牧獸醫(yī);2017年08期

8 劉杰濤;孟彥淼;;兔瘟的新特點與防治措施[J];科學種養(yǎng);2016年09期

9 肖娜;王玉蘭;;一例兔瘟的診治[J];北方牧業(yè);2012年11期

10 洪學;;初冬養(yǎng)兔防兔瘟[J];山東農(nóng)機化;2009年11期

相關會議論文 前10條

1 范志宇;胡波;魏后軍;徐為中;王芳;薛家賓;;近年我國兔瘟流行特點分析與疫苗研究動態(tài)[A];第十一屆中國兔肉節(jié)會刊[C];2013年

2 鄭愛武;郜雅琨;;兔場兔瘟防治[A];第八屆（2018）兔業(yè)發(fā)展大會論文集[C];2018年

3 謝金文;王金良;楊慧;宋峰;沈志強;;兔瘟的診治與體會[A];首屆（2011）中國兔業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2011年

4 劉長浩;;一例獺兔兔瘟免疫失敗案例分析[A];第四屆（2014）中國兔業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2014年

5 張慶明;;由一例兔瘟病例看獺兔免疫程序[A];第八屆（2018）兔業(yè)發(fā)展大會論文集[C];2018年

6 白同臣;曲海波;;一例兔瘟與大腸桿菌混合感染的診治[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

7 李峰;李敏;劉吉山;姚春陽;;一例兔瘟與巴氏桿菌病混合感染的診治[A];第四屆（2014）中國兔業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2014年

8 王純潔;王初一;趙懷平;;兔病毒性出血癥的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分第12次暨中國動物病理生理學專業(yè)委員會第11次學術討論會論文集[C];2003年

9 祖立闖;王金良;沈志強;;兔病毒性出血癥病毒VP60蛋白的截短表達與活性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第八次學術研討會論文集[C];2010年

10 張申英;張欣欣;劉晶;盧敏;汪垣;;重組丙型肝炎病毒包膜蛋白2抗體檢測及其臨床意義[A];中華醫(yī)學會第七次全國感染病學術會議論文匯編[C];2001年

相關重要報紙文章 前10條

1 王桂民;冬春季節(jié)謹防兔瘟病[N];山東科技報;2019年

2 山西省畜牧業(yè)協(xié)會兔業(yè)分會 常�？�;兔瘟防控辦法[N];河北科技報;2016年

3 記者 章勇;兔瘟基因工程疫苗獲批今年首個一類新獸藥[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2017年

4 山西省畜牧業(yè)協(xié)會兔業(yè)分會 常福俊;春季養(yǎng)兔應注意什么[N];河北科技報;2017年

5 肅寧縣農(nóng)業(yè)局 劉五俊;如何防治兔瘟[N];河北科技報;2017年

6 陳淑蘊;春養(yǎng)獺兔重防疫[N];河南科技報;2017年

7 肅寧縣農(nóng)業(yè)局 劉五俊;春季勿忘防兔瘟[N];河北科技報;2015年

8 國家兔產(chǎn)業(yè)技術體系崗位科學家 河北農(nóng)業(yè)大學教授 谷子林;防疫兔瘟講究技巧[N];河北科技報;2014年

9 曹縣農(nóng)業(yè)局 李海軍 朱冬梅 李憲立;夏防兔瘟四招[N];菏澤日報;2005年

10 肅寧縣農(nóng)業(yè)局 劉明 劉五俊;冬季要嚴防兔瘟發(fā)生[N];河北科技報;2012年

相關博士學位論文 前5條

1 王鳳英;食物特異性IgA抗體與兒童過敏性紫癜的相關性研究[D];蘇州大學;2018年

2 劉文慧;基于小型化及功能化抗體的抗腫瘤新藥設計[D];浙江大學;2019年

3 張大鵬;VP60蛋白的原核表達、抗體制備及VP60基因轉化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年

4 陶鴿如;表達兔瘟病毒VP60-P2的轉基因兔球蟲激發(fā)特異性免疫應答的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2017年

5 于作;表達兔出血癥病毒vp60基因的重組犬2型腺病毒的構建及其免疫效力評價[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 任冉陽;兔瘟病毒的VP60截段基因原核表達及抗體檢測金標試紙的初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

2 魯忠祥;兔瘟病毒VP60基因重組真核質(zhì)粒的構建及其免疫原性[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 周游;重組表達兔瘟病毒VP60蛋白的巴氏桿菌突變株的構建[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2018年

4 張文義;抗Rab19多克隆抗體的制備及Rab19相互作用蛋白的篩選[D];廈門大學;2018年

5 李鵬飛;禽Ⅰ群腺病毒病病原和抗體檢測方法的建立及其在血清學調(diào)查中的應用[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2017年

6 王紅茹;血清抗磷脂酶A2受體抗體水平與特發(fā)性膜性腎病免疫治療效果的相關性[D];鄭州大學;2019年

7 梁真潔;H5和H7亞型禽流感ELISA抗體檢測方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2019年

8 王夢汝;1 MXRA7互作蛋白的篩選及驗證 2 重組ATP5B表位多肽及其多克隆抗體的制備及鑒定[D];蘇州大學;2018年

9 陳朋剛;延安市主要豬繁殖障礙性病毒病抗體檢測及綜合防控措施研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

10 彭麗丹;20例電壓門控鉀通道復合物相關抗體自身免疫性腦炎的臨床分析[D];鄭州大學;2018年

本文編號：2738550