【摘要】：卵清蛋白酶解制備的多肽具有抗氧化、抗菌、抗疲勞等作用,被廣泛應(yīng)用于食品保健領(lǐng)域。生物活性肽具有促細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,但卵清酶解制備的多肽在細(xì)胞培養(yǎng)方面的應(yīng)用鮮有報(bào)道。本文采用高壓酶解法,制備了卵清多肽復(fù)合物,研究了其理化性質(zhì)和對(duì)貼壁細(xì)胞的促生長(zhǎng)效果,為卵清多肽在細(xì)胞培養(yǎng)方面的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。論文首先簡(jiǎn)要介紹了生物活性肽、蛋白水解物和卵清蛋白水解物三個(gè)方面的制備方法和研究現(xiàn)狀。其次以水解度為指標(biāo),通過(guò)酶篩選(堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶)、單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)高壓酶解卵清蛋白的工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:胰酶水解效果優(yōu)于其他五種酶,水解最佳工藝為壓力120MPa、溫度50 ℃pH值7.0和酶/底物(E/S)=1:2.5(質(zhì)量比),水解度最高可以達(dá)到45.13%。然后對(duì)制備的高壓酶解卵清蛋白多肽的理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:高壓酶解卵清多肽在pH值2-10之間具有較高的溶解性、熱穩(wěn)定性和起泡性,泡沫穩(wěn)定性較低。氨基酸檢測(cè)和分子量檢測(cè)證明其水解物中含有大量有益于細(xì)胞生長(zhǎng)的氨基酸,水解度較高。最后通過(guò)細(xì)胞傳代培養(yǎng)、生長(zhǎng)曲線測(cè)試、降血清測(cè)試、纖維素介質(zhì)分離純化等方法,檢測(cè)了高壓酶解卵清多肽對(duì)兩種疫苗生產(chǎn)常用細(xì)胞BHK-21細(xì)胞和Marc-145細(xì)胞的促細(xì)胞生長(zhǎng)效果。結(jié)果表明:添加0.25%卵清多肽后,兩種細(xì)胞的最大增殖密度分別為6.69×10~5cells/mL和4.75×10~5cells/mL,是正常培養(yǎng)細(xì)胞的1.56倍和1.73倍;細(xì)胞倍增時(shí)間分別為21.25h和27.94h,比正常培養(yǎng)細(xì)胞分別縮短了 6.97h和4.24h。兩種細(xì)胞均可以穩(wěn)定傳代15代以上,且生長(zhǎng)形態(tài)無(wú)明顯變化。試驗(yàn)還證實(shí):添加0.25%的高壓酶解卵清多肽可以減少細(xì)胞培養(yǎng)中的血清含量,這對(duì)降低疫苗等生物制品的生產(chǎn)成本具有重要意義。此外,分離純化實(shí)驗(yàn)表明:自制的卵清水解多肽中可能含有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)——EH4。如果在高壓酶解卵清多肽中去除EH4后,是否其促細(xì)胞生長(zhǎng)效果更明顯,有待進(jìn)一步研究。綜上所述,本研究制備的高壓酶解卵清多肽對(duì)兩種動(dòng)物細(xì)胞有促生長(zhǎng)活性,具有在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用的前景和開發(fā)價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q813.1

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本文編號(hào)：2570429