【摘要】：激活素A(activin A)屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的多功能生長和分化因子,在機體發(fā)育的不同階段以及不同組織中具有不同的生物學作用,如誘導胚胎早期發(fā)育、促進垂體前葉腺細胞分泌卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、抑制活化巨噬細胞分泌炎性因子以及誘導B淋巴瘤細胞凋亡等。激活素A可由免疫系統(tǒng)的多種細胞產(chǎn)生,并對免疫細胞功能具有調(diào)節(jié)作用,如巨噬細胞、單核細胞、T淋巴細胞、樹突狀細胞以及中性粒細胞等均可分泌激活素A。小膠質(zhì)細胞廣泛分布于腦和脊髓中,被認為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中定居的巨噬細胞。激活素A雖然能影響機體多種組織來源的巨噬細胞活性,但對神經(jīng)來源的巨噬細胞即小膠質(zhì)細胞活化的調(diào)控機制仍未闡明。因此,本論文利用小鼠來源的小膠質(zhì)細胞系BV2細胞,探討激活素A對細菌內(nèi)毒素LPS活化BV2細胞功能的調(diào)控作用及其機制。1.激活素A抑制LPS活化BV2細胞的作用本實驗首先采用RT-PCR檢測激活素A及其受體、信號傳導蛋白Smads在BV2細胞中的表達,結(jié)果顯示激活素A、激活素ⅡA型受體(activin typeⅡA receptor,Act RⅡA)、激活素ⅡB型受體(activin typeⅡB receptor,Act RⅡB)、Smad2,3,4 m RNA在BV2細胞中均有表達,提示激活素A可作用于BV2細胞發(fā)揮生物學效應(yīng)。研究進一步通過Giemsa染色觀察BV2細胞形態(tài)學變化,結(jié)果顯示LPS刺激BV2細胞發(fā)生明顯的形態(tài)學改變,而激活素A與LPS聯(lián)合作用時,能明顯抑制LPS誘導的BV2細胞形態(tài)學改變。激活素A單獨作用BV2細胞,對NO分泌及i NOS m RNA表達無明顯影響,但對IL-6、IL-1β及TNF-α等的分泌具有明顯抑制作用。LPS作為經(jīng)典的巨噬細胞活化因子,對BV2細胞NO及IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性細胞因子分泌以及i NOS、IL-6、IL-1β、TNF-αm RNA表達均具有促進作用,而激活素A則對LPS誘導的NO及炎性細胞因子分泌和m RNA表達均具有抑制作用。為了進一步探討激活素A對LPS活化BV2細胞抑制作用的機制,實驗首先采用RT-PCR檢測了BV2細胞激活素信號傳導相關(guān)分子的表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn)激活素A和LPS單獨作用均能誘導Act RⅡA、Act RⅡB及Smad2和Smad3 m RNA表達,而對Smad4 m RNA表達無明顯影響;激活素A與LPS二者聯(lián)合作用組與單獨LPS組相比,Act RⅡA、Act RⅡB及Smad2和Smad3 m RNA表達水平降低。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS明顯促進BV2細胞TLR4的表達,而激活素A雖然對TLR4表達無明顯影響,但卻能明顯抑制LPS上調(diào)的TLR4表達;而激活素A和LPS均能促進TLR2表達,二者聯(lián)合作用更明顯。上述結(jié)果提示激活素A可能通過抑制LPS作用的主要受體TLR4表達,進而抑制LPS誘導BV2細胞活化作用。2.Smad3在BV2細胞介導激活素A作用的機制研究Smad3是經(jīng)典的激活素信號傳導蛋白,上述研究也顯示,激活素A作用BV2細胞后Smad3 m RNA表達升高。因此,本研究采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法使BV2細胞過表達Smad3,進一步檢測激活素A及LPS對炎性細胞因子分泌的影響。結(jié)果顯示,在BV2細胞過表達Smad3后,與pc DNA3空質(zhì)粒對照組比較,IL-6、IL-1β及TNF-αm RNA表達均升高,LPS作用后,Smad3過表組炎性因子的分泌及表達也明顯高于LPS刺激的pc DNA3對照組。同時,BV2細胞Smad3過表達后,Act RⅡA和Act RⅡB的表達明顯增強,但對Smad4的表達有明顯的抑制作用。流式細胞術(shù)檢測TLR2及TLR4受體的表達結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS和激活素A對Smad3過表達的BV2細胞TLR2表達無明顯影響;Smad3過表達后,LPS對TLR4表達作用明顯增強,且激活素A對LPS誘導的TLR4表達也有明顯的抑制效應(yīng)。綜上所述,激活素A對LPS活化BV2細胞具有明顯的抑制作用,其作用與TLR4表達及Smad3信號途徑有關(guān)。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Alev Deli;Emanuel Kreidl;Stefan Santifaller;Barbara Trotter;Katja Seir;Walter Berger;Rolf Schulte-Hermann;Chantal Rodgarkia-Dara;Michael Grusch;;Activins and activin antagonists in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2008年11期

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本文編號：2489785