【摘要】：近海海洋沉積物中海洋細(xì)菌資源豐富,存在很多潛在功能細(xì)菌和潛在新物種,具有重要的研究?jī)r(jià)值。本文以威海榮成海參養(yǎng)殖池沉積物樣品為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,結(jié)合純培養(yǎng)和免培養(yǎng)測(cè)序技術(shù),探究了樣品中細(xì)菌的群落組成以及在富集前后細(xì)菌區(qū)系的變化,并發(fā)現(xiàn)了 56株潛在新物種。同時(shí),完成了五株海洋新菌的多相分類分析,豐富了海洋細(xì)菌的資源。本次富集培養(yǎng)分為兩種處理,一種為傳統(tǒng)的富集培養(yǎng)方法,命名為A處理,一種是在傳統(tǒng)富集培養(yǎng)體系中添加具有捕食能力的沉積物慢生單胞菌,命名為F處理。兩種處理中純培養(yǎng)和免培養(yǎng)測(cè)序結(jié)果均證明,與富集前相比,富集后細(xì)菌的數(shù)量顯著增加,多樣性有所提高。在富集培養(yǎng)過程中,可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性表現(xiàn)為先增加后減少,在第21天多樣性最高。本方法尤其適用于擬桿菌門,厚壁菌門和梭桿菌門細(xì)菌類群的富集分離,Parcubacter/a和熱袍菌門在富集培養(yǎng)后出現(xiàn),但對(duì)于藍(lán)藻門的分離不適用。同時(shí),與A處理相比,F處理在對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)菌數(shù)量和多樣性減少,群落結(jié)構(gòu)差異明顯。據(jù)此,可以指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)方法的進(jìn)一步改進(jìn),同時(shí)對(duì)擬桿菌門等特定細(xì)菌類群的分離提供借鑒意義。另外,通過本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,在威海榮成海參養(yǎng)殖池沉積物樣品中,含有豐富的海洋細(xì)菌資源,有待于進(jìn)一步開發(fā)。從威海近海沉積物中分離到三株海洋新菌,菌株編號(hào)分別是FA042T,HF004T,D2T,經(jīng)多相分類分析,確定FA042T為李玄淳屬的新種,命名為紅色李玄淳菌(Hyunsoonleelarubra。HF004T為海球菌屬的新種,命名為海泥海球菌(Halioglobus lutris)。D2T為卵鏈菌屬的新種,命名為沉積物卵鏈菌(Catenovulum sediminis)。FA042T菌落呈紅色,絕對(duì)好氧菌,桿狀,沒有鞭毛,不能滑動(dòng)。生長(zhǎng)的最適條件是:溫度33℃,pH7.0-7.5,鹽度為2-3%�；�16SrDNA分析結(jié)果,FA042T與濟(jì)州島李玄淳菌(Hyunsoonleella jejuensis)最相近,相似度為95%。主要脂肪酸成分為 iso-C15:0,iso-C15:1G,C15:0,iso-C17:03-OH 和 iso-C15:03-OH。主要呼吸醌型為MK-6。主要極性脂為三種未知脂質(zhì),兩種未知的氨脂和磷脂酰乙醇胺。DNAG+V含量為38.5mol%。建議FA042T(=KCTC42398T=MCCC 1H00110T)代表擬桿菌門李玄淳屬的新種,命名為紅色李玄淳菌(Hyunsoonleella rubra)。菌株HF004T是絕對(duì)好氧菌,桿狀(長(zhǎng)1.3-1.8μm,寬0.4-0.6lnm),不能滑動(dòng),革蘭氏陰性菌。生長(zhǎng)的最適條件是:溫度28℃,pH7.5-8.0,鹽度為2-3%。通過分析16SrDNA,HF004T與海球菌屬最相近,相似度為95.6%-96.1%。主要呼吸醌型為 Q-8。主要脂肪酸成分為 summed feature 3(i.e.C16:1 ω7c and/or iso-C15:02-OH),C17:1cω8c和C18:1ω7c。主要極性脂為雙磷脂酰甘油,磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺。DNA G+C含量約56.9mol%。建議HF004T(=KCTC 42395T=MCCC 1H00127T)代表變形菌門海仙菌科海球菌屬的新種,命名為海泥海球菌 CHalioglobus lutimaris)。菌株D2T為絕對(duì)好氧菌,桿狀,噬瓊脂,側(cè)生鞭毛,革蘭氏陰性菌。生長(zhǎng)最適條件是:溫度37℃,pH7.5-8.0,鹽度為2-3%。通過分析16SrDNA,D2T與卵鏈菌屬最相近,相似度為93.9%-96.3%。主要呼吸醌型為Q-8。主要脂肪酸成分為 summedfeature3(i.e.C16:1 ω7cand/oriso-C15:02-OH),C16:0,C10:03-OH,C18:1ω7c和C12:0。主要極性脂為磷脂酰乙醇胺,磷脂酰甘油和兩種氨磷脂。DNA G+C 含量約 40.4 mol%。建議 D2T(=KCTC 42869T=MCCC 1H00129T)代表變形菌門交替單胞菌科卵鏈菌屬的新種,命名為沉積物卵鏈菌(Catenovulum sediminis)。從海南省陵水縣黎安港采集的紅藻表面分離到兩株海洋細(xì)菌,分別編號(hào)為0182T,DC003T。經(jīng)多相分類鑒定,確定0182T為藏紅花黃色線菌屬的一個(gè)新種,命名為藻居藏紅花黃色線菌(Crocinitomix algico/a)。DC003T為賴興巴赫氏菌屬的一個(gè)新種,命名為變色賴興巴赫氏菌(Reichenbachiellaversicolor)。菌株0182T為絕對(duì)好氧菌,沒有鞭毛,菌落顏色為黃色,革蘭氏陰性菌,桿狀(長(zhǎng)0.9-2.5μm,寬0.2-0.4μm)。生長(zhǎng)最適條件是:溫度30℃,pH7.0-7.5,鹽度為2-3%。通過分析16SrDNA,0182T與產(chǎn)觸媒藏紅花黃色線菌最相近,相似度為94.6%。主要呼吸醌型為MK-7。主要脂肪酸成分為iso-C15:0,C15:0 iso-C17:03-OH和iso-C15:1G。主要極性脂為氨磷脂,兩種未知的氨脂和四種未知的磷脂。DNA G+C 含量為 35.4 mol%。建議 0182T(=KCTC 42868T=MCCC 1H00128T)代表擬桿菌門藏紅花黃色線菌科藏紅花黃色線菌屬的新種,命名為藻居藏紅花黃色線菌(Crocinitomixalgicola)。菌株DC003T為絕對(duì)好氧菌,沒有鞭毛,噬瓊脂,革蘭氏陰性。生長(zhǎng)最適條件是:溫度28℃,pH7.0-7.5,鹽度為2-3%。通過分析16SrDNA,DC003T與賴興巴赫氏菌屬最相近,相似度為93.1%-94.7%。主要呼吸醌型為MK-7。主要脂肪酸為 iso-C15:0,summed feature 3(i.e.C16:1 ω7c and/or iso-C15:02-OH),C16:1ω5c和 summed feature 5(i.e.C18:2 ω6,9c and/or Cl8:0 ANTE)。主要極性脂為三種未知脂質(zhì),兩種氨磷脂,一種未知成分的磷脂和磷脂酰乙醇胺。DNAG+C含量約37.0mol%。建議DC003T(=KCTC42867T=MCCC1H00130T)代表擬桿菌門賴興巴赫氏菌屬的一個(gè)新種,命名為變色賴興巴赫氏菌(Reichenbachiella versicolor)。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q93

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2331589