本文選題：OCT4 + STAT3��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景與目的OCT4是位于細胞核內(nèi)的POU家族關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一,胚胎于細胞、生殖干細胞中常見到OCT4的大量表達.OCT4對于ESC的維干及ESC的自我更新意義重大。最新的研究發(fā)現(xiàn),OCT4在胚胎性癌、精原細胞瘤以及生殖系統(tǒng)以外的某些惡性腫瘤中也有著高表達,意味著OCT4在維持腫瘤干細胞的分化潛能中也有作用,當(dāng)細胞中OCT4維持特定濃度時,細胞保持其干性,當(dāng)細胞中OCT4表達下調(diào)時,細胞分化成具有各種功能的細胞,喪失其干性。STAT3是STATs家族中的重要一員,STAT3的功能是參與細胞的增殖、分化、凋亡,研究表明,持續(xù)激活的STAT3可引發(fā)癌細胞的惡化和擴散。OCT4、STAT3影響干細胞的分化及癌細胞EMT作用的機制并不完善,本文通過研究OCT4抑制STAT3進線粒體,使細胞色素C(cytochrome C)活性降低的過程,在能量代謝角度探究OCT4在干細胞的分化及癌細胞EMT作用的機制。方法用PCR技術(shù),轉(zhuǎn)化技術(shù)制作STAT3、OCT4質(zhì)粒,OCT4階段體、點突變體,以人腎上皮293T細胞,宮頸癌細胞系HeLa為材料,轉(zhuǎn)入外源STAT3、OCT4、及其突變體,確定OCT4與STAT3在細胞質(zhì)存在相互作用關(guān)系,并確定OCT4與STAT3結(jié)合的關(guān)鍵位點。用線粒體分離術(shù),免疫熒光蛋白[質(zhì)]印跡法(Westem blot)等方法,測定轉(zhuǎn)入OCT4質(zhì)粒后STAT3入線粒體的量及細胞色素C活性,測定細胞ATP的生成量。結(jié)果在人腎上皮293T細胞中轉(zhuǎn)入外源OCT4后STAT3入線粒體量明顯減少,細胞呼吸作用降低,使用試劑盒測得細胞ATP產(chǎn)生量減少。在人腎上皮293T細胞,頸癌細胞系HeLa分別轉(zhuǎn)入外源OCT4全長、OCT4截斷體、OCT4點突變體后,提取細胞線粒體蛋通過白免疫熒光蛋白[質(zhì)]印跡法測得OCT4 144位影響OCT4與STAT3的結(jié)合,通過試劑盒測得,轉(zhuǎn)入OCT4的癌細胞細胞色素C活性降低。ATP量減少。結(jié)論OCT4可以通過抑制STAT3進線粒體,使得STAT3與細胞色素C在線粒體內(nèi)的的結(jié)合變少,進而使細胞的ATP合成量減少。STAT3與OCT4的結(jié)合與OCT4第144位點相關(guān)。推測在普通細胞轉(zhuǎn)化為IPS細胞時,癌細胞發(fā)生EMT作用轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂懈尚园┘毎麜r,OCT4均通過STAT3通路調(diào)控細胞色素C,降低細胞呼吸鏈活性從而調(diào)控細胞的干性及分化。
[Abstract]:Background & objective OCT4 is one of the key transcription factors of POU family located in the nucleus. The high expression of OCT4 is often seen in embryonic cells and reproductive stem cells. OCT4 is of great significance for the maintenance of ESC and the self-renewal of ESC. New research has found that OCT4 is also highly expressed in embryonic carcinomas, seminoma, and some malignancies outside the reproductive system, suggesting that OCT4 also plays a role in maintaining the differentiation potential of tumor stem cells. When OCT4 is maintained at a specific concentration, the cell remains dry. When the expression of OCT4 is down-regulated, the cells differentiate into cells with various functions. The loss of their dryness. STAT3 is an important member of the stats family. The function of STAT3 is involved in cell proliferation. Differentiation, apoptosis, studies have shown that sustained activation of STAT3 can cause the deterioration and diffusion of cancer cells. OCT4STAT3 affects the differentiation of stem cells and the mechanism of EMT of cancer cells is not perfect. In this paper, we studied the inhibition of STAT3 into mitochondria by OCT4. In the process of decreasing cytochrome C (cytochrome C) activity, the mechanism of OCT4 in differentiation of stem cells and the role of cancer cells in EMTs was explored in the view of energy metabolism. Methods STAT3OCT4 plasmids and point mutants were prepared by PCR and transformation techniques. Human renal epithelial 293T cells and cervical cancer cell line HeLa were transformed into exogenous STAT3OCT4 and its mutants. The interaction between OCT4 and STAT3 in cytoplasm was determined. The key sites for the binding of OCT4 to STAT3 were identified. The amount of STAT3 into mitochondria and cytochrome C activity were measured by mitochondrial isolation and Western blot. Results after transfection of exogenous OCT4 into 293T cells of human renal epithelium, the amount of STAT3 into mitochondria decreased, the cell respiration decreased, and the ATP production of cells was decreased by using kit. After human renal epithelial 293T cells and cervical cancer cell line HeLa were transferred into exogenous OCT4 full-length OCT4 truncated OCT4 point mutants, the mitochondrial eggs were extracted. The binding of OCT4 to STAT3 was determined by immunofluorescence protein [qualitative] blotting. The activity of pigment C in OCT4 cells was decreased. ATP content was decreased. Conclusion by inhibiting STAT3 into mitochondria, OCT4 can reduce the binding of STAT3 to cytochrome C in mitochondria, and then decrease the amount of ATP synthesis. The binding of STAT3 to OCT4 is related to the 144 site of OCT4. It is speculated that when the normal cells are transformed into IPS cells, the EMT action of cancer cells changes to that of dry cancer cells. Both of them regulate cytochrome C through STAT3 pathway, decrease the activity of cell respiratory chain and regulate the dryness and differentiation of the cells.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q25

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本文編號：2093942