本文選題：CRAC通道 + Orai　； 參考：《四川師范大學》2017年碩士論文

【摘要】：Ca~(2+)是真核細胞重要的細胞內(nèi)信使。細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的變化是許多生理進程所必需的。鈣庫操縱的鈣通道(SOCs)是鈣離子流入細胞內(nèi)的主要的方式,其中最著名最具特色的是鈣離子釋放激活鈣離子(CRAC)通道。CRAC通道調(diào)節(jié)許多基本的細胞功能,包括基因表達、細胞增殖、細胞分泌等。在近十幾年里,作為CRAC通道的Orai蛋白和作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子感受器的STIM蛋白的發(fā)現(xiàn)是理解CRAC通道的機制和功能取得極大進步的基礎。當內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫釋放后,STIM蛋白發(fā)生一系列的構(gòu)象變化與Orai蛋白相互作用,從而開放CRAC通道,允許細胞外的鈣離子流入細胞內(nèi)。但CRAC通道門控的分子機制仍然知之甚少。為了進一步揭示CRAC通道門控的分子機制,我們表達并分離純化了果蠅源的Orai蛋白和STIM蛋白不同片段。在過程中對STIM蛋白不同片段的分離純化條件進行了優(yōu)化,對STIM蛋白不同片段進行了功能測試,并最終獲得了較穩(wěn)定并具有功能的STIM蛋白片段,同時對純化的Orai蛋白和STIM蛋白片段進行了等溫滴定測定其相互作用。我們發(fā)現(xiàn)Orai蛋白與STIM蛋白片段親和力較強,這為后續(xù)通過單分子熒光能量轉(zhuǎn)移技術和蛋白技術共結(jié)晶進一步的研究兩蛋白的相互作用的構(gòu)象變化奠定了基礎。
[Abstract]:Ca~(2) is an important intracellular messenger in eukaryotic cells. Changes in intracellular Ca~(2 concentration are necessary for many physiological processes. Calcium channel SOCsis the main way of calcium ions flowing into cells. The most famous and characteristic is calcium ion release activated calcium ion CRAC.CRAC channel regulates many basic cellular functions, including gene expression and cell proliferation. Cell secretion, etc. In recent years, the discovery of Orai protein as CRAC channel and STIM protein as endoplasmic reticulum calcium receptor has been the basis of great progress in understanding the mechanism and function of CRAC channel. When the endoplasmic reticulum calcium reservoir was released, a series of conformational changes occurred between STIM protein and Orai protein, thus opening up the CRAC channel and allowing extracellular calcium ions to flow into the cell. However, little is known about the molecular mechanism of CRAC channel gating. In order to further reveal the molecular mechanism of CRAC channel gating, we expressed and purified different fragments of Orai and STIM proteins from Drosophila melanogaster. In the process, the conditions of isolation and purification of different STIM protein fragments were optimized, and the functional tests of different STIM protein fragments were carried out. Finally, stable and functional STIM protein fragments were obtained. At the same time, the interaction between purified Orai protein and STIM protein was determined by isothermal titration. We found that Orai protein has strong affinity with STIM protein fragment, which lays a foundation for further study on conformation change of interaction between two proteins by single molecule fluorescence energy transfer technique and protein technology.
【學位授予單位】：四川師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q51

【參考文獻】

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本文編號：1884297