本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌DsrA-sRNA和oriC轉(zhuǎn)錄對(duì)DNA復(fù)制起始的影響　出處：《內(nèi)蒙古大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： DsrA-sRNA oriC轉(zhuǎn)錄 復(fù)制起始 大腸桿菌

【摘要】：細(xì)菌sRNA(small noncoding RNA)廣泛參與細(xì)菌生命活動(dòng),包括基因表達(dá)、代謝以及應(yīng)激反應(yīng),但仍未見sRNA對(duì)DNA復(fù)制起始影響的系統(tǒng)研究。經(jīng)過(guò)敲除11種sRNA并分析所得突變體,發(fā)現(xiàn)大腸桿菌DsrA-sRNA影響DNA復(fù)制起始,是個(gè)復(fù)制起始負(fù)調(diào)控因子。DsrA-sRNA與dnaA-mRNA可能有相互作用,但這種相互作用并未影響DnaA的表達(dá)。然而,qPCR實(shí)驗(yàn)說(shuō)明DsrA-sRNA過(guò)表達(dá)提升rpoS、dps、hchA、cbpA和yiaG基因的表達(dá),敲除dsrd降低dps基因的表達(dá),而Dps的表達(dá)會(huì)阻止DNA復(fù)制起始。另外,細(xì)菌雙雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)HchA與Dps蛋白有相互作用,而HchA與DnaA蛋白沒(méi)有相互作用。有趣的是,△dps細(xì)胞中過(guò)表達(dá)DsrA-sRNA促進(jìn)DNA復(fù)制起始,與在野生型細(xì)胞中過(guò)表達(dá)DsrA-sRNA的效果相反�！鱤chA細(xì)胞中過(guò)表達(dá)DsrA-sRNA仍然抑制復(fù)制起始。綜上所述,DsrA-sRNA對(duì)復(fù)制起始的抑制作用是通過(guò)Dps來(lái)實(shí)現(xiàn)的,然而,缺失Dps時(shí),DsrA-sRNA以別的途徑影響復(fù)制起始。復(fù)制原點(diǎn)附近基因穿越oriC的轉(zhuǎn)錄是復(fù)制起始必須的。為了探討oriC轉(zhuǎn)錄對(duì)復(fù)制起始的作用機(jī)制,把PBAD啟動(dòng)子插入在染色體oriC右側(cè),其轉(zhuǎn)錄能夠穿越oriC,構(gòu)建了 WT-PBAD、△dksA-PBAD和△mfd-PBAD菌株。經(jīng)流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)阿拉伯糖的加入并不影響WT-PBAD細(xì)胞的復(fù)制起始;阿拉伯糖誘導(dǎo)對(duì)△dksA-PBAD細(xì)胞的復(fù)制起始的影響依賴于營(yíng)養(yǎng),在LB培養(yǎng)基中AdksA-PBAD細(xì)胞的復(fù)制起始頻率明顯高于△dksA細(xì)胞,阿拉伯糖的加入進(jìn)一步提高其復(fù)制起始頻率。因此,oriC轉(zhuǎn)錄的確促進(jìn)染色體復(fù)制起始,但其作用由DksA活性來(lái)調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Bacterial sRNA(small noncoding is widely involved in bacterial life activities, including gene expression, metabolism and stress response. However, there was no systematic study on the effect of sRNA on the replication initiation of DNA. After knockout of 11 sRNA and analysis of the mutants obtained, it was found that Escherichia coli DsrA-sRNA affected the replication initiation of DNA. DsrA-sRNA may interact with dnaA-mRNA, but this interaction does not affect the expression of DnaA. QPCR assay showed that overexpression of DsrA-sRNA enhanced the expression of rpoSdpshchAhbpA and yiaG genes, and knockout dsrd decreased the expression of dps gene. The expression of Dps prevents the initiation of DNA replication. In addition, bacterial two-hybrid studies show that HchA interacts with Dps protein, while HchA does not interact with DnaA protein. Interestingly. Overexpression of DsrA-sRNA in dps cells promotes the initiation of DNA replication. In contrast to overexpression of DsrA-sRNA in wild-type cells, overexpression of DsrA-sRNA in hchA cells still inhibited replication initiation. The inhibitory effect of DsrA-sRNA on replication initiation is achieved through Dps, however, when Dps is missing. DsrA-sRNA affects replication initiation in other ways. The transcriptional translocation of oriC in the vicinity of replication origin is necessary for replication initiation. In order to investigate the mechanism of oriC transcription on replication initiation. The PBAD promoter was inserted into the right side of chromosome oriC and its transcription was able to traverse oric to construct WT-PBAD. DksA-PBAD and mfd-PBAD strains. Flow cytometry analysis showed that arabinose did not affect the replication of WT-PBAD cells. The effect of arabinose induction on replication initiation of dksA-PBAD cells is dependent on nutrition. The replication initiation frequency of AdksA-PBAD cells in LB medium was significantly higher than that of dksA cells, and arabinose increased the replication initiation frequency. OriC transcription does promote the initiation of chromosome replication, but its effect is regulated by DksA activity.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q75

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本文編號(hào)：1389139