本文關(guān)鍵詞：山東地區(qū)死亡鴨胚中細(xì)菌分離鑒定及沙門(mén)氏菌耐藥性與毒力基因檢測(cè)　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：沙門(mén)氏菌是一種重要的食源性致病菌,具有廣泛的宿主性,作為人畜共患病其成為危害養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展最為嚴(yán)重的病原菌之一,尤其在種鴨養(yǎng)殖過(guò)程中沙門(mén)氏菌可以通過(guò)種蛋垂直傳播。自2014年至2016年,山東規(guī)�；N鴨孵化場(chǎng)的胚胎死亡率和弱雛率明顯升高,并且死亡鴨胚的類(lèi)型以臭蛋為主,初步懷疑是大面積細(xì)菌感染所致。由于抗菌藥物在畜禽疾病防治中的大量使用,使得沙門(mén)氏菌對(duì)抗生素的耐藥率不斷上升,特別是多重耐藥現(xiàn)象的不斷出現(xiàn),給沙門(mén)氏菌病的有效防治帶來(lái)了困難。本實(shí)驗(yàn)旨在研究死亡鴨胚中病原菌的感染狀況,以探究鴨胚在孵化過(guò)程中死亡原因;通過(guò)藥敏試驗(yàn)和耐藥基因檢測(cè),初步掌握鴨源沙門(mén)氏菌在山東的耐藥情況,探究耐藥情況與臨床常用抗菌藥的相互關(guān)系,為指導(dǎo)生產(chǎn)中種鴨的合理用藥提供理論依據(jù);分析鴨源沙門(mén)氏菌毒力基因,對(duì)沙門(mén)氏菌致病性影響,研發(fā)安全有效的疫苗奠定基礎(chǔ)。本研究共分四部分。1.死亡鴨胚中細(xì)菌的分離鑒定通過(guò)對(duì)無(wú)破損的死亡鴨胚進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)染色、16SrDNA鑒定等方法,從12個(gè)批次,315枚鴨胚中共分得細(xì)菌282株,分屬26個(gè)種,其中245枚存在細(xì)菌感染,感染率為77.8%。在分離的所有細(xì)菌中,大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和奇異變形桿菌分別占38.30%(108/282)、26.24%(74/282)和8.16%(23/282),是死亡鴨胚中的主要致病菌群。結(jié)果表明,造成種鴨孵化場(chǎng)胚胎死亡率和弱雛率明顯升高的主要原因是細(xì)菌感染所致,且沙門(mén)氏菌是主要的致病菌之一。2.鴨源沙門(mén)氏菌耐藥性調(diào)查采用K-B法對(duì)74株鴨源沙門(mén)氏菌進(jìn)行17種抗生素(氨基糖苷類(lèi)藥物、喹諾酮類(lèi)藥物、β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物等)的耐藥性檢測(cè)。結(jié)果顯示,74株沙門(mén)氏菌對(duì)17種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥:β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的耐藥性較高,氨芐西林耐藥率31.08%,頭孢噻吩耐藥率29.73%;氨基糖苷類(lèi)藥物中慶大霉素的耐藥率最高占22.97%,其次是鏈霉素9.46%和卡那霉素2.70%;喹諾酮類(lèi)藥物耐藥率較低,環(huán)丙沙星和諾氟沙星耐藥率均為4.05%,氧氟沙星耐藥率為2.70%;四環(huán)素和氯霉素類(lèi)藥物耐藥率均較低分別為5.41%和4.05%。在分離的74株沙門(mén)氏菌中兩種藥物以上多重耐藥菌株的耐藥率占78.37%。該項(xiàng)研究調(diào)查表明,在治療和預(yù)防山東地區(qū)種鴨孵化場(chǎng)致病性細(xì)菌感染時(shí)可以選擇性配合使用喹諾酮類(lèi)藥物和卡那霉素,在選擇使用喹諾酮類(lèi)藥物時(shí),要按照生產(chǎn)具體情況和藥物使用說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格控制劑量。3.鴨源沙門(mén)氏菌耐藥基因的檢測(cè)與鑒定對(duì)鑒定的74株沙門(mén)氏菌進(jìn)行氨基糖苷類(lèi)鈍化酶基因三重PCR檢測(cè),該74株沙門(mén)中有13株擴(kuò)增出ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib、aph(3’)-IIa的特異性條帶,三重基因攜帶率17.56%,16S甲基化酶基因未檢出;喹諾酮類(lèi)耐藥菌株P(guān)CR擴(kuò)增結(jié)果表明,qnrS基因攜帶率14.85%,oqxA基因攜帶率9.46%,oqxB基因攜帶率2.70%,qnrA、qnrB、qnrC和qnrD基因未檢出;β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因TEM基因攜帶率27.03%。本研究結(jié)果表明氨基糖苷類(lèi)鈍化酶基因、喹諾酮基因和β-內(nèi)酰胺基因廣泛存在于鴨源沙門(mén)氏菌中,其耐藥性與檢測(cè)的耐藥基因符合率存在差異不呈顯著的相關(guān)性。4.鴨源沙門(mén)氏菌毒力基因的檢測(cè)與鑒定對(duì)鑒定的74株沙門(mén)氏菌進(jìn)行8種毒力基因PCR檢測(cè),SPI-1、SPI-3、SPI-4、SPI-5、stn和invJ的檢出率分別是81.19%、94.59%、94.59%、79.73%、100%和66.22%。SPI-2和fim未檢出。74株沙門(mén)氏菌中,僅攜帶2種毒力基因菌株占所有菌株的2.7%,5種毒力基因與6種毒力基因菌株分別占所有菌株的31.06%和56.76%。本研究結(jié)果表明,山東地區(qū)鴨胚中沙門(mén)氏菌分離株普遍攜帶有多種毒力島核心蛋白基因,這可能是導(dǎo)致孵化過(guò)程中鴨胚死亡的原因之一,而沙門(mén)氏菌毒力基因與致病性的關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:This study was conducted to study the drug resistance of Salmonella in Shandong province . The results showed that the drug resistance rate of Salmonella in Shandong province was higher than that in Shandong province .

【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1389436