本文關(guān)鍵詞：雄激素對急性海馬腦片神經(jīng)元樹突棘和突觸蛋白的快速作用　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 雄激素 海馬腦片 海馬CA1區(qū) 樹突棘 突觸蛋白 非基因組效應(yīng)

【摘要】：目的:本課題以急性海馬腦片神經(jīng)元作為研究對象,觀察睪酮(T)、雙氫睪酮(DHT)和睪酮-牛血清白蛋白(T-BSA)對急性海馬腦片神經(jīng)元樹突棘密度及突觸蛋白SYN和PSD95的快速作用,探討雄激素非基因組效應(yīng)對海馬神經(jīng)元突觸形態(tài)可塑性的影響。方法:1急性海馬腦片的制備和神經(jīng)元活性鑒定。SD大鼠麻醉后,斷頭取腦,置于人工腦脊液(ACSF)中。剝離并修整海馬組織,振動切片機制備300μm的冠狀海馬腦片,置于ACSF中孵育。每只大鼠制備5片急性海馬腦片,分別在0 min、15 min、30 min、60 min和120 min 5個時間點轉(zhuǎn)移到含有細胞核染料DAPI和PI的ACSF中孵育,清洗多余熒光染料后,裱片于載玻片上,激光共聚焦顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元的形態(tài),通過熒光染料的染色情況鑒定急性腦片海馬神經(jīng)元的活性。2雄激素對急性海馬腦片神經(jīng)元樹突棘密度的快速影響。制備急性海馬腦片。隨機分為對照組(CON組)、T組、DHT組和T-BSA組。根據(jù)參考文獻和預(yù)實驗結(jié)果,T組和DHT組藥物作用濃度為10 n M,T-BSA組為0.36 n M,CON組給予等量的二甲基亞砜。根據(jù)參考文獻和預(yù)實驗結(jié)果,藥物作用時間為1 h。給藥結(jié)束后,4%多聚甲醛固定,進行Golgi-Cox染色。激光共聚焦顯微鏡對海馬CA1區(qū)神經(jīng)元頂樹突第2級或第3級樹突的樹突棘成像,通過Imaris軟件計算所選樹突上的樹突棘密度,進行各組樹突棘密度間的比較。3雄激素對急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95的快速影響。制備急性海馬腦片。實驗分組以及藥物作用濃度和作用時間同上一部分。給藥結(jié)束后,4%多聚甲醛固定,30%蔗糖溶液脫水處理,包埋后進行冰凍切片,取每個腦片固定表面深度的三張切片,切片厚度10μm,裱片于載玻片上。應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)染色方法,激光共聚焦顯微鏡對海馬CA1區(qū)突觸蛋白SYN和PSD95進行觀察并比較各組平均相對熒光強度。結(jié)果:1急性海馬腦片的制備和神經(jīng)元活性鑒定的結(jié)果。制備的急性海馬腦片肉眼觀察為淡黃色,舒展平整。選擇表層下層面的細胞,激光共聚焦顯微鏡觀察到細胞邊界清晰且折光性好,立體感及層次感較強,細胞核和顆粒均不可見。在細胞核染料DAPI和PI雙重染色顯示,急性海馬腦片神經(jīng)元在0 min、15 min、30 min、60 min、120 min 5個時間點,活細胞百分比分別為79.92±1.66%、80.06±0.94%、80.60±0.97%、79.48±0.92%和79.87±0.88%,各組之間神經(jīng)元活性無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2雄激素對急性海馬腦片神經(jīng)元樹突棘密度快速影響的結(jié)果。Golgi-Cox染色結(jié)果顯示:與CON組(2.10±0.15 thorns/μm)相比,T組(2.89±0.19 thorns/μm)、DHT組(3.01±0.16 thorns/μm)和T-BSA組(2.90±0.22 thorns/μm)的樹突棘密度均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間樹突棘密度無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3雄激素對急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95快速影響的結(jié)果。SYN免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與CON組(42.26±3.66)相比,T組(54.22±4.10)、DHT組(56.01±4.90)和T-BSA組(55.34±6.12)的平均相對熒光強度均有明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間SYN平均相對熒光強度無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。PSD95免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與CON組(70.26±4.55)相比,T組(84.12±5.34)、DHT組(83.98±3.37)和T-BSA組(85.84±4.45)的平均相對熒光強度均有明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間PSD95平均相對熒光強度無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1實驗條件下制備的急性海馬腦片神經(jīng)元在2 h內(nèi)細胞活性穩(wěn)定良好。2雄激素在短時間內(nèi)快速增加了急性海馬腦片神經(jīng)元樹突棘密度。3雄激素在短時間內(nèi)快速增加了急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95的表達。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R338

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉振偉,李立君,劉傳繢;海馬腦片盲法膜片鉗全細胞記錄技術(shù)[J];生理學(xué)報;2001年05期

2 羅峻,胡志安,黎海蒂,姚忠祥,徐海偉;海馬腦片LTP中鈣變化的激光共聚焦掃描技術(shù)測定方法[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年03期

3 盧步峰，，魯友明，黃詒森;鈣離子和蛋白激酶C對大鼠缺血海馬腦片谷氨酸堆積的影響[J];生物化學(xué)雜志;1995年01期

4 于天蓮;趙小貞;林凌;;四周齡大鼠海馬腦片培養(yǎng)方法[J];解剖學(xué)研究;2009年02期

5 王　畫,趙鵬,黃婭林,程介士;應(yīng)用激光共聚焦掃描技術(shù)對海馬腦片神經(jīng)元內(nèi)鈣的觀察[J];生理學(xué)報;1998年03期

6 景洪江,程義勇,李樹田,章廣遠;谷氨酰胺對大鼠海馬腦片谷氨酸遞質(zhì)釋放的影響[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2000年04期

7 王玉蘭,徐鐵軍,樊紅彬,劉志安,張鳳真,彭裕文;離體培養(yǎng)海馬腦片與在體發(fā)育海馬結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)比較研究[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2002年06期

8 胡謀先,吳遠明,王阿敬,朱長庚;糖皮質(zhì)激素對大鼠腦皮層、海馬及海馬腦片神經(jīng)元膜電位的影響[J];同濟醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1998年06期

9 羅東明;展麗英;劉祚周;;針刺頻率對大鼠海馬腦片群體鋒電位和場興奮性突觸后電位的影響[J];四川生理科學(xué)雜志;1991年Z1期

10 李鳳敏,徐淑梅,沙日娜;四乙銨對缺氧時海馬腦片誘發(fā)電位的影響[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1998年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周華;唐玉紅;鄭煜;;羥基馬桑毒素對大鼠海馬腦片錐體細胞電活動的影響[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

2 嚴樂勤;胡海濤;張緯萍;王夢令;沈建中;魏爾清;;一種定量評價離體海馬腦片缺糖/缺氧損傷的新方法[A];中國藥理學(xué)會第十屆全國神經(jīng)學(xué)術(shù)會議暨浙江省藥理學(xué)會2002年年會論文摘要集[C];2002年

3 余國良;魏爾清;;藥物對大鼠離體海馬腦片的缺氧缺糖損傷的神經(jīng)保護作用[A];中國藥理學(xué)會第十屆全國神經(jīng)學(xué)術(shù)會議暨浙江省藥理學(xué)會2002年年會論文摘要集[C];2002年

4 宮新偉;楊帆;劉建盛;陸欽池;梁培基;張溥明;;海馬腦片內(nèi)神經(jīng)元癇性放電的傳導(dǎo):多電極記錄研究[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

5 王秀麗;李楚華;黃俊g

本文編號：1315611