本文關(guān)鍵詞：雄激素對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元樹(shù)突棘和突觸蛋白的快速作用　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:本課題以急性海馬腦片神經(jīng)元作為研究對(duì)象,觀察睪酮(T)、雙氫睪酮(DHT)和睪酮-牛血清白蛋白(T-BSA)對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元樹(shù)突棘密度及突觸蛋白SYN和PSD95的快速作用,探討雄激素非基因組效應(yīng)對(duì)海馬神經(jīng)元突觸形態(tài)可塑性的影響。方法:1急性海馬腦片的制備和神經(jīng)元活性鑒定。SD大鼠麻醉后,斷頭取腦,置于人工腦脊液(ACSF)中。剝離并修整海馬組織,振動(dòng)切片機(jī)制備300μm的冠狀海馬腦片,置于ACSF中孵育。每只大鼠制備5片急性海馬腦片,分別在0 min、15 min、30 min、60 min和120 min 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)轉(zhuǎn)移到含有細(xì)胞核染料DAPI和PI的ACSF中孵育,清洗多余熒光染料后,裱片于載玻片上,激光共聚焦顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元的形態(tài),通過(guò)熒光染料的染色情況鑒定急性腦片海馬神經(jīng)元的活性。2雄激素對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元樹(shù)突棘密度的快速影響。制備急性海馬腦片。隨機(jī)分為對(duì)照組(CON組)、T組、DHT組和T-BSA組。根據(jù)參考文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,T組和DHT組藥物作用濃度為10 n M,T-BSA組為0.36 n M,CON組給予等量的二甲基亞砜。根據(jù)參考文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,藥物作用時(shí)間為1 h。給藥結(jié)束后,4%多聚甲醛固定,進(jìn)行Golgi-Cox染色。激光共聚焦顯微鏡對(duì)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元頂樹(shù)突第2級(jí)或第3級(jí)樹(shù)突的樹(shù)突棘成像,通過(guò)Imaris軟件計(jì)算所選樹(shù)突上的樹(shù)突棘密度,進(jìn)行各組樹(shù)突棘密度間的比較。3雄激素對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95的快速影響。制備急性海馬腦片。實(shí)驗(yàn)分組以及藥物作用濃度和作用時(shí)間同上一部分。給藥結(jié)束后,4%多聚甲醛固定,30%蔗糖溶液脫水處理,包埋后進(jìn)行冰凍切片,取每個(gè)腦片固定表面深度的三張切片,切片厚度10μm,裱片于載玻片上。應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)染色方法,激光共聚焦顯微鏡對(duì)海馬CA1區(qū)突觸蛋白SYN和PSD95進(jìn)行觀察并比較各組平均相對(duì)熒光強(qiáng)度。結(jié)果:1急性海馬腦片的制備和神經(jīng)元活性鑒定的結(jié)果。制備的急性海馬腦片肉眼觀察為淡黃色,舒展平整。選擇表層下層面的細(xì)胞,激光共聚焦顯微鏡觀察到細(xì)胞邊界清晰且折光性好,立體感及層次感較強(qiáng),細(xì)胞核和顆粒均不可見(jiàn)。在細(xì)胞核染料DAPI和PI雙重染色顯示,急性海馬腦片神經(jīng)元在0 min、15 min、30 min、60 min、120 min 5個(gè)時(shí)間點(diǎn),活細(xì)胞百分比分別為79.92±1.66%、80.06±0.94%、80.60±0.97%、79.48±0.92%和79.87±0.88%,各組之間神經(jīng)元活性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2雄激素對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元樹(shù)突棘密度快速影響的結(jié)果。Golgi-Cox染色結(jié)果顯示:與CON組(2.10±0.15 thorns/μm)相比,T組(2.89±0.19 thorns/μm)、DHT組(3.01±0.16 thorns/μm)和T-BSA組(2.90±0.22 thorns/μm)的樹(shù)突棘密度均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間樹(shù)突棘密度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3雄激素對(duì)急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95快速影響的結(jié)果。SYN免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與CON組(42.26±3.66)相比,T組(54.22±4.10)、DHT組(56.01±4.90)和T-BSA組(55.34±6.12)的平均相對(duì)熒光強(qiáng)度均有明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間SYN平均相對(duì)熒光強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。PSD95免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:與CON組(70.26±4.55)相比,T組(84.12±5.34)、DHT組(83.98±3.37)和T-BSA組(85.84±4.45)的平均相對(duì)熒光強(qiáng)度均有明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);T組、DHT組和T-BSA組之間PSD95平均相對(duì)熒光強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1實(shí)驗(yàn)條件下制備的急性海馬腦片神經(jīng)元在2 h內(nèi)細(xì)胞活性穩(wěn)定良好。2雄激素在短時(shí)間內(nèi)快速增加了急性海馬腦片神經(jīng)元樹(shù)突棘密度。3雄激素在短時(shí)間內(nèi)快速增加了急性海馬腦片神經(jīng)元突觸蛋白SYN和PSD95的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R338

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