本文關(guān)鍵詞：腦心肌炎病毒衣殼蛋白與HuvEc相互作用蛋白的初步篩選　出處：《西北民族大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一種單股正鏈無(wú)囊膜的RNA病毒,病毒的衣殼是由VP1、VP2、VP3及VP4四種結(jié)構(gòu)蛋白組成,主要的抗原結(jié)構(gòu)域位于VP1、VP2及VP3上,其中抗原性最強(qiáng)的為VP1。目前全世界EMCV流行的區(qū)域越來(lái)越廣泛,且感染率呈逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì),但其侵染宿主的分子機(jī)制尚不明確。本試驗(yàn)旨在通過(guò)酵母雙雜交技術(shù),篩選人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HuvEc)中與 EMCV 衣殼蛋白有相互作用的蛋白,并分析篩選到的目的蛋白在細(xì)胞中的定位、分子功能以及主要參與的生物學(xué)過(guò)程。本試驗(yàn)應(yīng)用分裂-泛素酵母雙雜交系統(tǒng),構(gòu)建EMCV衣殼蛋白VP1,VP2,VP3誘餌質(zhì)粒,進(jìn)行HuvEc細(xì)胞的cDNA文庫(kù)篩選。通過(guò)6次酵母雙雜交篩選試驗(yàn),β-半乳糖苷酶分析去除陰性克隆,酵母回返實(shí)驗(yàn)去除假陽(yáng)性克隆,初步篩選得到了57個(gè)有相互作用的蛋白。其中,與VP1互作的蛋白15個(gè),與VP2互作的蛋白39個(gè),VP3互作的蛋白3個(gè)。BNIP3、C14orf1、SERP1、UBC、YIPF6與Bait VP1和VP2均互作;UBB與VP1,VP3均互作;SPCS1、ZUFSP與BaitVP1、VP2和VP3均互作。利用UniProtKB、PANTHER等生物信息學(xué)分析軟件分析獲知,篩選得到的互作蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等一些細(xì)胞器中。這些蛋白的分子功能主要有催化活性、蛋白結(jié)合活性、分子結(jié)構(gòu)活性、轉(zhuǎn)運(yùn)活性、翻譯調(diào)節(jié)活性、通道調(diào)節(jié)活性等。主要參與的生物學(xué)過(guò)程有生物調(diào)節(jié)、細(xì)胞形成、細(xì)胞代謝、細(xì)胞增殖、細(xì)胞定位、轉(zhuǎn)運(yùn)及免疫反應(yīng)等許多個(gè)過(guò)程。本試驗(yàn)的初步篩選為以后研究病毒感染及病毒致病的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ),為進(jìn)一步研究EMCV受體提供參考。
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉慧敏;常洪濤;楊霞;賀秀媛;陳陸;王新衛(wèi);李永濤;趙軍;王川慶;;豬腦心肌炎與豬圓環(huán)病毒病二聯(lián)滅活疫苗的研制和免疫效力[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2017年01期

2 王婷;葛懷娜;郭宏;;酵母雙雜交技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2015年05期

3 常洪濤;劉慧敏;陳陸;楊霞;趙軍;王新衛(wèi);姚惠霞;王川慶;;不同動(dòng)物源腦心肌炎病毒的分離、鑒定和全基因組序列分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年09期

4 章俊;馬亞瓊;邱敏姿;楊蕾;卜陽(yáng);湯s，

本文編號(hào)：1311141