本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌感光雙組分系統(tǒng)的構(gòu)建

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【摘要】：雙組分系統(tǒng)是普遍存在于細菌中的信號傳導(dǎo)系統(tǒng),它主要由兩部分構(gòu)成:組氨酸激酶(HK)和反應(yīng)調(diào)控蛋白(RR),組氨酸激酶屬于跨膜轉(zhuǎn)運蛋白,可以感受外界的信號并進行自磷酸化,隨后將磷酸基團傳遞給相應(yīng)的反應(yīng)調(diào)控蛋白RR,活化的反應(yīng)調(diào)控蛋白可以結(jié)合到相應(yīng)的啟動子區(qū)域,啟動下游基因的表達。不同的雙組分系統(tǒng)能夠感受不同的外界信號,為了系統(tǒng)的研究細菌中的雙組分系統(tǒng),我們利用了光遺傳的技術(shù)來重構(gòu)組氨酸激酶,將感光基因Cphl的感光片段與組氨酸激酶的保守的組氨酸激酶結(jié)構(gòu)域連接起來,形成感光的融合蛋白,從而使重構(gòu)的雙組分系統(tǒng)能夠感受紅光,用光信號代替原有的信號。感光組氨酸激酶的表達是雙載體的表達系統(tǒng),實驗中我們通過篩選得到了 8種雙組分系統(tǒng)的感光融合體系(UhpB-UhpA,PhoR-PhoB,YedV-YedW,RstB-RstA,GlrK-GlrR,CusS-CusR,PhoQ-PhoP 和 CpxA-CpxR)。為了進一步的應(yīng)用,我們對UhpB-UhpA這組感光雙組分系統(tǒng)進行了光頻的實驗,檢測在不同頻率的刺激下系統(tǒng)的響應(yīng)情況。得出這組感光系統(tǒng)具有對于低頻的信號有響應(yīng)對于高頻的信號無響應(yīng)的特點,類似于低通濾波器的性質(zhì)。我們的實驗進一步證明了光對于研究細菌雙組分系統(tǒng)的優(yōu)勢,并且為將來進一步系統(tǒng)的研究細菌雙組分系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q78

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本文編號：1302073