本文關鍵詞：參與DNA損傷應答的果蠅miRNA的系統(tǒng)鑒定及其調(diào)節(jié)凋亡功能的初步研究

  更多相關文章： 果蠅DNA 損傷應答 miRNA 凋亡

【摘要】：維持基因組的穩(wěn)定性對細胞和組織發(fā)揮正常功能至關重要[1]。每天,人體內(nèi)每個細胞在內(nèi)源和外源因素作用下可發(fā)生多至105個DNA損傷。為了應對這些損傷,機體進化出復雜的系統(tǒng)來識別DNA損傷,停止細胞周期進程,調(diào)節(jié)細胞新陳代謝,修復DNA損傷,并在損傷不能修復時誘導細胞程序性死亡等。這一系列信號調(diào)控通路被稱為DNA損傷應答通路[2,3]。如果DNA損傷不能及時、正確的被修復,會導致堿基突變或染色體的畸變,并最終導致腫瘤等惡性疾病的發(fā)生。嚴重的DNA損傷也可導致細胞死亡或細胞的衰老。在DNA損傷應答調(diào)控中,許多DNA損傷應答相關蛋白可以被磷酸化、泛素化、蘇素化、甲基化和乙�；刃揎椪{(diào)節(jié)[4,5]。除了多種酶對DNA損傷應答相關蛋白的修飾調(diào)節(jié)外,DNA損傷后,非編碼RNA包括微小非編碼RNA(miRNAs)和長鏈非編碼RNA(lncRNAs)也可以通過對靶基因進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)參與DNA損傷應答[6]。miRNA是一類長度在22個核苷酸左右的非編碼RNA。早期研究指出,敲低miRNA生成和功能發(fā)揮必須的dicer基因和ago2基因后,DNA損傷后細胞的生存率和細胞周期檢測點阻滯水平會顯著降低[7,8]。mi RNA發(fā)揮功能的主要方式是通過堿基互補配對與靶基因mRNA結(jié)合,從而導致靶基因mRNA降解或mRNA翻譯終止。DNA發(fā)生損傷時,miRNA可以直接調(diào)節(jié)DNA損傷應答相關蛋白的表達調(diào)節(jié)DNA損傷修復進程,也可以通過調(diào)節(jié)包括p53、E2F在內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達來調(diào)節(jié)DNA損傷修復進程。本研究收取了野生型果蠅w 1118與p53突變果蠅p53 5A-1-42-4小時胚胎,使用4Gy輻照處理,提取總RNA,寄送公司進行RNA-seq分析差異表達的miRNA。通過該策略,共鑒定發(fā)現(xiàn)了44個差異表達的miRNA;使用qPCR方法,U6 RNA作為內(nèi)參,對隨機選出10個miRNA,包括6個上調(diào)的miRNA(miR-263b,miR-137,miR-34,miR-375,miR-987,miR-284)和4個下調(diào)的miRNA(miR-1002,miR-2b-2,miR-7,miR-3)的RNA-seq結(jié)果進行了驗證,結(jié)果顯示qPCR結(jié)果與RNA-seq結(jié)果趨勢一致,進一步證實RNA-seq結(jié)果真實可信。由于超過70%的果蠅miRNA已建立突變動物,本實驗室由Bloomington果蠅株共享中心獲得了30株mi RNA突變的果蠅株,對其中的19株純合存活果蠅進行了DNA損傷敏感性檢測。檢測結(jié)果顯示,10株miRNA突變果蠅對DNA損傷敏感,2株抵抗,7株與野生型果蠅沒有差異。使用caspase-3染色,對10株輻照敏感的miRNA突變果蠅的翅膀胚芽組織(Wing Disc)進行檢測,觀察miRNA突變對DNA損傷誘導的細胞凋亡的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),輻照導致7株miRNA突變果蠅的凋亡水平顯著提升。使用分析軟件microRNA(http://www.microrna.org)和TargetScan(http://www.targetscan.org)對mi RNA的靶基因進行預測,發(fā)現(xiàn)果蠅促凋亡基因家族Reaper-Hid-Grim中的grim和sickle,效應caspase drice等是這些miRNA的潛在靶基因。本研究為在生物體水平闡明miRNA對DNA損傷應答的響應及對細胞凋亡的調(diào)控提供了重要數(shù)據(jù)基礎。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q78

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐耀忠;Thiobase DNA: the chemistry and some applications in cancer studies[J];Progress in Natural Science;2000年06期

2 傅衍 ,牛冬 ,阮暉 ,陳海燕;COMPARISON OF DIFFERENT ENZYMES AND PROBES AND THEIR COMBINATIONS IN DNA FINGERPRINTING[J];Journal of Zhejiang University Science;2001年04期

3 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

4 張鵬 ,孟繼本 ,龍江 ,松浦輝男 ,王永梅;Synthesis of Benzo [α]phenoxazin-5-one Derivatives and Their Interactions with DNA[J];Chinese Journal of Chemistry;2002年05期

5 ;DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL TAQ DNA POLYMERASE IN RAPD[J];四川動物;2002年02期

6 ;Genetic Diversity of Three Aristichthys nobilis Populations and One Inbreeding Stock[J];Wuhan University Journal of Natural Sciences;2002年02期

7 強曉藝;DNA計算的應用與展望[J];西安聯(lián)合大學學報;2002年02期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 謝傳曉;Evidence for Base Substitutions and Repair of DNA Mismatch Damage Induced by Low Energy N~+ Ion Beam Implantation in E. coli[J];High Technology Letters;2003年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學術會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學學術年會暨生殖健康講習班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學會第十次全國婦產(chǎn)科學術會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學組、絕經(jīng)學組、計劃生育學組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學與生物力學學術會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第29屆學術年會暨首屆生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導全身炎癥反應綜合征的作用及其機制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學化工學會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟專家論壇論文集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領先”作為DNA[N];經(jīng)濟觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應用DNA技術一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學基礎醫(yī)學部生物化學與分子生物學教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學;2014年

2 池晴佳;DNA動力學與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學;2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復旦大學;2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴增的DNA自組裝技術的研究[D];南京大學;2014年

5 黃學鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復旦大學;2013年

6 隋江東;APE1促進DNA-PKcs介導hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復制及細胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學;2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復中的作用及機制研究[D];東北師范大學;2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學;2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學;2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學;2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細胞肺癌根治術前后腫瘤負荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學;2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學;2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學;2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學;2015年

，

本文編號：1300379