本文關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒早期E6蛋白的識(shí)別檢測(cè)及晚期L1蛋白的組裝調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 人乳頭瘤病毒早期致癌蛋白E6 類病毒粒子 多金屬氧簇 分子識(shí)別 自組裝 熒光響應(yīng)

【摘要】：人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一類能侵染人類皮膚和粘膜基底層鱗狀上皮細(xì)胞的、小的、雙鏈DNA病毒。HPV能夠在女性(宮頸、陰道、外陰、肛門和口咽部)和男性(口咽、肛門和陰莖)中引發(fā)多種癌癥,也可誘發(fā)許多良性疾病,如生殖器疣、扁平疣等。全世界范圍內(nèi),每年大約有500,000例宮頸癌患者發(fā)病,導(dǎo)致超過250,000病人死亡,這使得宮頸癌成為女性健康的第二大殺手。因此,通過對(duì)高危型HPV的識(shí)別,可以采用免疫或其他靶向治療的方法來預(yù)防癌癥的發(fā)生。HPV致癌蛋白E6是引發(fā)HPV相關(guān)惡性腫瘤所必需的,它在由HPV所引起的癌癥和癌前病變的轉(zhuǎn)化細(xì)胞中,能夠一直表達(dá)并可以保持轉(zhuǎn)錄活性。E6蛋白通過靶向許多細(xì)胞通路來確保病毒DNA的復(fù)制,它在與HPV相關(guān)的腫瘤中是一個(gè)主要的致癌蛋白。E6和E7是宮頸癌細(xì)胞中唯一表達(dá)的HPV蛋白,且經(jīng)常被看作是宮頸癌產(chǎn)生的標(biāo)志。HPV L1重組表達(dá)載體在牛痘、桿狀病毒或酵母系統(tǒng)中表達(dá)能夠形成類病毒粒子(virus-like particles,VLPs)。VLPs是由大約72個(gè)L1五聚體組裝形成的類似于天然病毒的殼體。目前,VLPs雖然主要用于疫苗的研究,但是在基因治療和藥物傳遞等其他生物醫(yī)學(xué)方面,VLPs也顯示了巨大的潛力。多金屬氧簇是一類前過渡元素-氧陰離子簇,它具有明確的尺寸和可配置的電荷,而且還具有產(chǎn)生有機(jī)-無機(jī)雜化的能力。以上這些優(yōu)勢(shì),使得多金屬氧簇在抗癌、抗病毒、抗腫瘤及抗菌等方面有著巨大的潛力。此外,一些多金屬氧簇有著特殊的光學(xué)性質(zhì),因而它們可以作為一種新型的探針應(yīng)用于生物標(biāo)記和識(shí)別。在本論文中,我們基于分子間的相互作用研究了一種含Eu的多金屬氧簇作為分子探針去識(shí)別HPV早期致癌蛋白E6以及類病毒粒子包覆雙鏈DNA的過程。我們希望該研究可以為HPV的早期識(shí)別及治療提供一個(gè)新的思路。本研究的第一部分,我們利用含Eu的多金屬氧簇靈敏的熒光特性,選擇了一個(gè)含有9個(gè)負(fù)電荷的多金屬氧簇EuW10作為熒光探針去檢測(cè)HPV早期致癌蛋白E6。首先,基于本組之前的工作,我們選擇了HPV E6蛋白上一段富含堿性氨基酸的小肽,并構(gòu)建了一個(gè)小肽和EuW10相互作用的平臺(tái),從而實(shí)現(xiàn)了EuW10對(duì)E6蛋白的檢測(cè)。在E6小肽與EuW10相互作用的研究中,我們發(fā)現(xiàn)E6小肽能同EuW10自組裝成一個(gè)規(guī)整的球體,并且E6小肽可促使EuW10的熒光顯著增強(qiáng)。之后我們利用時(shí)間分辨熒光、等溫滴定量熱法對(duì)二者的作用機(jī)理進(jìn)行了揭示,發(fā)現(xiàn)二者相互作用的主要驅(qū)動(dòng)力為靜電相互作用。在明確了E6小肽同EuW10之間具有強(qiáng)烈的相互作用后,我們進(jìn)一步利用EuW10對(duì)E6蛋白進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),E6蛋白同樣可以與EuW10自組裝成球體,并能使得EuW10的熒光顯著增強(qiáng)。這說明我們利用EuW10檢測(cè)E6蛋白的方法是可行的。通過這一部分的研究,我們?yōu)槎嘟饘傺醮刈鳛樯锾结樀膽?yīng)用提供了實(shí)踐支持,這對(duì)HPV引起的宮頸癌的癌前早期檢測(cè)具有重要的意義。本研究的第二部分,我們利用HPV16 L1五聚體通過體外自組裝的方法將雙鏈DNA包覆到VLPs內(nèi)部,通過引入一種具有AIE效應(yīng)的熒光小分子探針——DSAI標(biāo)記目標(biāo)dsDNA,實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)DNA的熒光監(jiān)測(cè)和表征。另外,我們還結(jié)合一系列的生物和化學(xué)手段對(duì)組裝后病毒粒子的粒徑、成分進(jìn)行了表征,從而證明DSAI-dsDNA確實(shí)能被包覆到組裝后的VLPs中。本章節(jié)的研究結(jié)果對(duì)進(jìn)一步發(fā)展以VLPs為載體的基因傳遞研究將將具有至關(guān)重要的意義。尤其是,我們引入的熒光小分子探針具有實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)目標(biāo)dsDNA的能力。該監(jiān)測(cè)方法方便、快捷且成本低,為進(jìn)一步開展以VLPs為載體的基因傳遞研究提供了便利。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R373

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉志遠(yuǎn) ,許淑珍;人乳頭瘤病毒可導(dǎo)致哪些疾病?[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2003年03期

2 劉志遠(yuǎn) ,許淑珍;什么是人乳頭瘤病毒?[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

3 Baldwin S.;Santos C.;Mendez BrownE.;F. Garcia;侯巍;;比較患者自己與醫(yī)生指導(dǎo)下采集的樣本中特異性人乳頭瘤病毒[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè));2005年09期

4 舒t t ;馮慧敏;候云德;;人乳頭瘤病毒分子生物學(xué)研究新進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1991年01期

5 胡克，李清泉，，潘顯光，曹作炎，楊炯，李耀華;肺癌組織中人乳頭瘤病毒16型DNA相關(guān)序列的檢測(cè)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1995年03期

6 張澤兵,高文濤,歐陽(yáng)喈,鄭明;人乳頭瘤病毒在舌癌細(xì)胞中存在狀態(tài)分析[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

7 楊青,王莉,李青,孫博,高暉;人乳頭瘤病毒誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊(cè);2001年05期

8 王麗娜,宋文齡,陳偉,姜艷芳,付艷;人乳頭瘤病毒58型衣殼蛋白的表達(dá)及其抗體制備[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2005年04期

9 田希蘭;人乳頭瘤病毒與肺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年03期

10 Weissenborn S.J.;Nindl I.;Purdie K. ;李政霄;;光化性角化病的人乳頭瘤病毒DNA含量超過非黑色素瘤皮膚癌患者[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2005年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張衛(wèi);Margaret Stanley;;人乳頭瘤病毒16型結(jié)構(gòu)蛋白的研究[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國(guó)科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1998年

2 田永強(qiáng);張榮意;朱中元;;人乳頭瘤病毒線性平行雜交分型檢測(cè)條件的建立及優(yōu)化[A];2009年海南省微生物學(xué)檢測(cè)及質(zhì)量保證研討會(huì)論文集[C];2009年

3 秦逸秋;王祖兵;;人乳頭瘤病毒與人類腫瘤的相關(guān)性研究[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 劉宏圖;;人乳頭瘤病毒的分子流行病學(xué)與人乳頭瘤病毒的檢測(cè)及其臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一次全國(guó)女性生殖道感染研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

5 倪斌;趙蕓;史文娟;;云南省紅河地區(qū)女性人乳頭瘤病毒各亞型感染情況的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 楊紅英;楊旭;;云南省育齡婦女人乳頭瘤病毒各基因型感染分布的情況[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 程浩;;人乳頭瘤病毒的致病機(jī)制和防治策略[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 許海敏;;淺談感染人乳頭瘤病毒對(duì)細(xì)胞周期的影響與宮頸癌的關(guān)系[A];2013年第三屆長(zhǎng)三角地區(qū)病理技術(shù)新進(jìn)展研討會(huì)暨浙江省第八次病理技術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

9 王建捷;靳家玉;馮玲;郝薇;張玲;;人乳頭瘤病毒負(fù)荷量與宮頸病變關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 蔡艷群;宋志偉;郟伊范;潘曉;陳衛(wèi)青;王麗定;李彩琴;黃建蘭;朱無雙;倪敏;董琰;徐旖旎;;人乳頭瘤病毒與宮頸癌的研究進(jìn)展[A];2012年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 鄭莉麗;實(shí)時(shí)分子檢測(cè)人乳頭瘤病毒在歐洲推出[N];健康報(bào);2009年

2 北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科主任醫(yī)師 譚先杰;人乳頭瘤病毒的自述[N];健康時(shí)報(bào);2010年

3 黃冰;人乳頭瘤病毒毒在哪里？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

4 北京地壇醫(yī)院感染中心副主任醫(yī)師 劉彥春;人乳頭瘤病毒防治新篇[N];健康報(bào);2010年

5 衣曉峰;宮頸癌年輕化人乳頭瘤病毒是禍?zhǔn)譡N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

6 李天舒;西藏 女性人乳頭瘤病毒感染率低于全國(guó)水平[N];健康報(bào);2008年

7 衣曉峰;性激素與HPV感染有內(nèi)在關(guān)系[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

8 通訊員 聶松義;人乳頭瘤病毒基因工程疫苗研究獲突破[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

9 記者 余瑾毅 通訊員 蔡敏 實(shí)習(xí)生 羅安琪 孫競(jìng)雄;宮頸癌癌變基因密碼被部分破譯[N];湖北日?qǐng)?bào);2013年

10 中國(guó)工程院院士 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)理事長(zhǎng) 郝希山 李運(yùn)紅 胡顏 整理;四大誤區(qū)擋住癌癥康復(fù)路[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁思;人乳頭瘤病毒相關(guān)皮膚病發(fā)病機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

2 吳劍波;抗人乳頭瘤病毒體外藥效模型的探討[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

3 廖書杰;基于人乳頭瘤病毒的子宮頸癌發(fā)病機(jī)制探討和子宮頸癌疫苗的相關(guān)研究[D];華中科技大學(xué);2008年

4 徐茜;人乳頭瘤病毒導(dǎo)致子宮頸癌的分子生物學(xué)機(jī)制及其在免疫治療方面的應(yīng)用研究[D];華中科技大學(xué);2006年

5 王立良;人乳頭瘤病毒16型L1結(jié)構(gòu)基因的克隆、表達(dá)以及表達(dá)蛋白的結(jié)構(gòu)與功能的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

6 李遠(yuǎn)宏;人乳頭瘤病毒在某些皮膚病中的檢測(cè)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2001年

7 聶建輝;高通量人乳頭瘤病毒及人類免疫缺陷病毒假病毒檢測(cè)體系的建立及應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2015年

8 周小山;改造的人乳頭瘤病毒16型E6/E7融合蛋白的表達(dá)及免疫活性和抗癌作用實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

9 趙蔚明;低危型人乳頭瘤病毒優(yōu)化密碼E7基因的研究[D];山東大學(xué);2004年

10 洪少林;尖銳濕疣病變的人乳頭瘤病毒分子流行病學(xué)研究及L1序列多態(tài)性分析和在原核表達(dá)體系中的表達(dá)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊旭;人乳頭瘤病毒主要衣殼蛋白的優(yōu)化表達(dá)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 趙敏;同一個(gè)體中人乳頭瘤病毒34型變異株的分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

3 趙晶;人乳頭瘤病毒16型病毒樣顆粒發(fā)酵條件優(yōu)化及工藝控制研究[D];華東理工大學(xué);2013年

4 董國(guó)棟;人乳頭瘤病毒分型檢測(cè)在宮頸癌術(shù)后患者隨訪中的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 韓珈蓉;寧夏地區(qū)尖銳濕疣皮損人乳頭瘤病毒HPV基因分型的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

6 官海漣;2318例人乳頭瘤病毒基因分型及相關(guān)因素的分析[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

7 劉玉雪;人乳頭瘤病毒早期E6蛋白的識(shí)別檢測(cè)及晚期L1蛋白的組裝調(diào)控研究[D];吉林大學(xué);2017年

8 翁志聰;�？诘貐^(qū)人乳頭瘤病毒HPV感染的分子流行病學(xué)調(diào)查和相關(guān)雜交檢測(cè)芯片的初步研究[D];海南大學(xué);2013年

9 周支香;環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型及人乳頭瘤病毒6型和11型的實(shí)驗(yàn)研究[D];南華大學(xué);2010年

10 郭森;人乳頭瘤病毒快速分型的目視化基因芯片技術(shù)研究及應(yīng)用[D];西北大學(xué);2010年

本文編號(hào)：1300320