本文關(guān)鍵詞：豬傳染性胃腸炎流行毒株的分離鑒定及全基因組分析

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【摘要】：豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible Gastroenteritis virus,TGEV)是豬傳染性胃腸炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)的病原體。TGE是豬的一種急性、高度接觸性傳染病,以嘔吐、水樣腹瀉、脫水和對2周齡以內(nèi)仔豬具有高度致死率(通常為100%)為特征。該病于1946年在美國首次報道,目前已呈世界性分布。TGE常在每年的冬季和早春季節(jié)呈暴發(fā)性流行,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。本研究以檢測為TGEV陽性的豬小腸內(nèi)容物為材料進(jìn)行病毒分離;在添加0.3%胰酶的條件下分離到1株能在PK15細(xì)胞上穩(wěn)定增殖并能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變(CPE)的豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV-AHHF毒株)。為了確定新分離的TGEV-AHHF毒株對仔豬的致病性,用第五代分離毒(TCID50為10-4.12/0.1m L)對仔豬進(jìn)行攻毒實驗,本研究選取了TGEV、PEDV、PORV和SDCV抗原陰性,且TGEV抗體陰性的健康3日齡仔豬12頭,隨機分成2組,命名為攻毒組(T組)和陰性對照組(N組),每組6頭。攻毒組每頭口服1×106.12TCID50病毒液。陰性對照組口服10 m L DMEM,攻毒后每3 h觀察記錄臨床癥狀。結(jié)果顯示,攻毒后48 h,攻毒組出現(xiàn)嘔吐、腹瀉癥狀;陰性對照組未出現(xiàn)任何臨床癥狀。病理剖檢,攻毒組小腸壁變薄、變透明,腸內(nèi)充滿黃色液體,陰性對照組沒有明顯病理變化。病理切片結(jié)果顯示,攻毒組仔豬的腸道粘膜上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死和溶解,十二指腸和空腸的腸絨毛顯著萎縮,陰性對照組沒有明顯病理變化。熒光定量PCR檢測各組織臟器中的病毒含量結(jié)果顯示,攻毒組的空腸中的TGEV含量最高,其次是回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、胃和十二指腸,其他組織和陰性對照組均未檢測到TGEV。結(jié)果證實分離的TGEV-AHHF毒株能夠引起仔豬典型的TGE臨床癥狀、病理和組織學(xué)變化,具有致病性。通過RT-PCR,5′RACE和3′RACE擴增方法,獲得了該毒株的全基因序列,序列全長為28614 nt,包括5′非編碼區(qū)(nt 1-314),ORF1ab基因(nt 315-20368),S基因(nt 20365-24711),3a基因(nt 24830-25045),3b基因(nt 25139-25873),E基因(nt 25860-26108),M基因(nt26119-26907),N基因(nt 26920-28068),ORF7基因(nt 28074-28310)和3′非編碼區(qū)(nt28311-28614),全基因組序列分析顯示,TGEV-AHHF毒株核苷酸序列與豬傳染性胃腸炎病毒W(wǎng)H-1和SHXB毒株同源性最高(99.6%);進(jìn)化樹分析表明,由全基因構(gòu)建的進(jìn)化樹顯示TGEV-AHHF毒株與purdue群親緣關(guān)系較近,而與Miller群親緣關(guān)系較遠(yuǎn);重組性分析顯示,TGEV-AHHF毒株基因組中存在兩個潛在的重組區(qū)域,分別在ORF1a和S基因中,可能是purdue群與Miller群毒株之間重組的結(jié)果。本研究對TGEV現(xiàn)地流行毒株進(jìn)行分離鑒定、致病性及基因組結(jié)構(gòu)特性分析,不僅對于TGEV的遺傳進(jìn)化、致病機理等基礎(chǔ)性研究提供重要的理論基礎(chǔ),也在疾病的診斷、生物制品研制和防治工作方面具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.651

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本文編號：1293206