本文關(guān)鍵詞：石斑魚神經(jīng)肽Y的重組表達(dá)及生物活性研究

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【摘要】：神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一種由36個(gè)氨基酸殘基組成的神經(jīng)活性多肽,廣泛分布于脊椎動(dòng)物中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng),是含量最豐富的神經(jīng)肽之一。NPY含有5個(gè)酪氨基酸殘基,因其富含酪氨酸(Y),故被稱為神經(jīng)肽酪氨酸,屬于胰多肽家族的一員。目前研究的脊椎動(dòng)物中都發(fā)現(xiàn)有NPY,且不同物種間的NPY存在較高同源性。NPY除了可作為神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮作用,還具有提高攝食率與能量儲(chǔ)存、降低緊張與應(yīng)激等功能。NPY是目前發(fā)現(xiàn)活性最強(qiáng)的促攝食因子。本研究克隆了斜帶石斑魚NPY成熟肽序列,應(yīng)用pET-SUMO大腸桿菌表達(dá)載體連接,成功構(gòu)建表達(dá)斜帶石斑魚NPY成熟肽的pET-SUMO-NPY載體,通過原核大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)出可溶性蛋白。將NPY加入離體培養(yǎng)鯉魚下丘腦-垂體組織碎片體系中,利用熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)NPY對(duì)鯉魚下丘腦-垂體組織GH、GtH和PSS-2基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,濃度為100 nM的重組斜帶石斑魚NPY(r-ec NPY)顯著上調(diào)了GH基因轉(zhuǎn)錄水平(P0.05),重組及化學(xué)合成的NPY均顯著下調(diào)了PSS-2基因的表達(dá)(P0.05)。重組NPY組和合成NPY組對(duì)GtH基因表達(dá)的影響未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性(P0.05)。因此證明重組表達(dá)的斜帶石斑魚NPY具有生物活性。本研究將重組NPY按濃度梯度添加到飼料中,對(duì)錦鯉進(jìn)行為期6周的投喂實(shí)驗(yàn)。在第三周,對(duì)照組、Group-0.15(0.15μg r-ecNPY/g飼料)、Group-0.3(0.3μg r-ecNPY/g飼料)及Group-0.5(0.5μg r-ecNPY/g飼料)的周攝食率分別為4.079%、4.198%、4.284%及4.42%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯示,在第3周Group-0.5的攝食率顯著高于對(duì)照組(P0.05),證明重組NPY添加到飼料中對(duì)錦鯉的攝食具有一定的促進(jìn)作用。攝食實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,計(jì)算鯉魚相關(guān)的生長及營養(yǎng)指標(biāo)。結(jié)果顯示,對(duì)照組、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的特定生長率(specific growth rate,SGR)分別為1.5%、1.45%、1.42%及1.45%。對(duì)照組、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的日攝食率分別為3.94%、3.98%、4.05%及4.11%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,各NPY濃度實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在SGR以及日攝食率方面均無顯著性差異。魚體組成數(shù)據(jù)計(jì)顯示,對(duì)照組、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的總蛋白含量分別為491.1(g/kg)、446.4(g/kg)、546.3(g/kg)及489.6(g/kg)。對(duì)照組、Group-0.15、Group-0.3及Group-0.5的粗脂肪含量分別為151.6(g/kg)、141.9(g/kg)、135.1(g/kg)及115.9(g/kg)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的總蛋白和粗脂肪沒有顯著性差異,另外還有灰分、肝胰體比和內(nèi)臟體比等營養(yǎng)指標(biāo)也無顯著性差異。這表明重組NPY對(duì)錦鯉主要營養(yǎng)成分無太大影響,且不造成魚體內(nèi)肝臟的畸形。本實(shí)驗(yàn)研究表明,使用這3個(gè)濃度的NPY添加到飼料中喂養(yǎng)6周未顯著促進(jìn)實(shí)驗(yàn)魚的攝食與生長,僅在第3周高濃度組周攝食率顯著高于對(duì)照組。是否由于添加劑量尚不夠高,或經(jīng)過消化NPY的完整性受破壞,沒有足夠量進(jìn)入魚體發(fā)揮有效的促攝食與生長作用,值得進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 康啟源;李穎毅;陳策;朱江;杜喬;卞少華;趙志江;趙鋼;;神經(jīng)肽Y對(duì)腎臟的作用研究現(xiàn)狀[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2016年04期

2 解綬啟;張文兵;韓冬;麥康森;;水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物營養(yǎng)與飼料工程發(fā)展戰(zhàn)略研究[J];中國工程科學(xué);2016年03期

3 王春華;;綠色水產(chǎn)飼料添加劑芻議[J];江西飼料;2015年06期

4 代向燕;張瑋;卓子見;賀江燕;殷戰(zhàn);;魚類生長的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2014年12期

5 李文笙;王濱;;魚類生長抑素調(diào)控垂體生長激素分泌的作用機(jī)制[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2013年12期

6 汪小杰;毛若雨;張勇;滕達(dá);王秀敏;王建華;;SUMO在蛋白表達(dá)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2013年10期

7 方龍;梁旭方;何珊;;草魚禁食后NPY與血糖變化及NPY重組表達(dá)[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2013年05期

8 蔡海鶯;李楊;張輝;馮鳳琴;;基因設(shè)計(jì)對(duì)重組蛋白表達(dá)的影響研究進(jìn)展[J];生物工程學(xué)報(bào);2013年09期

9 熊海霞;;神經(jīng)肽Y的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年09期

10 吳殿君;曹永國;白鴿;王振全;劉磊;王建國;謝閃閃;劉國文;周昌芳;;重組奶牛NPY成熟肽基因在畢赤酵母中的高效表達(dá)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年07期

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本文編號(hào)：1272147