本文關(guān)鍵詞：塑化劑降解菌Acinetobacter sp.LMB-5的性能及其酯酶酶學(xué)性質(zhì)的研究

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【摘要】：鄰苯二甲酸酯(PAEs)作為一類常用的塑化劑,具有良好的可塑性,價(jià)格低廉,普遍應(yīng)用于社會(huì)生產(chǎn)的多個(gè)領(lǐng)域,如食品、化妝品、建筑等。PAEs在塑料產(chǎn)品的生產(chǎn),使用和處理過程中會(huì)遷移到環(huán)境中,目前河流、土壤、空氣中的PAEs含量逐漸增加。PAEs對(duì)人體健康和安全存在威脅,環(huán)境中的PAEs很難自然降解,因此,需要簡便且安全的方法來處理PAEs。微生物分解代謝PAEs不會(huì)形成二次污染,對(duì)環(huán)境友好,所以利用微生物降解PAEs具有極其重要的意義。實(shí)驗(yàn)室從長年使用塑料薄膜的大棚蔬菜基地中篩選了一株可降解PAEs的細(xì)菌-Acinetobacter sp.LMB-5,對(duì)它的基本形態(tài)特征進(jìn)行了研究。本論文在此基礎(chǔ)之上,對(duì)LMB-5做了深入探究。我們以鄰苯二甲酸二甲酯(DMP),鄰苯二甲酸二乙酯(DEP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)和鄰苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)為底物,發(fā)現(xiàn)LMB-5對(duì)側(cè)鏈簡單的PAEs降解效率高�？疾熳钸m培養(yǎng)條件,結(jié)果表明LMB-5降解PAEs的最適溫度是37℃,最適pH是6.0。當(dāng)?shù)孜顳BP濃度低于400 mg/L時(shí),LMB-5降解DBP的能力可以用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程描述。研究LMB-5分解代謝DBP的途徑,結(jié)果是氧化生成1,2-苯二甲酸丁基甲酯(BMP)和DMP,然后水解酯鍵形成PA,中間產(chǎn)物進(jìn)一步代謝。通過生物信息學(xué)對(duì)LMB-5的全基因組進(jìn)行了分析,從全基因組中挖掘了關(guān)鍵水解酶Est_3563,它的功能是轉(zhuǎn)化DBP為單酯DMP。體外克隆表達(dá)得到目的蛋白,研究其基本酶學(xué)性質(zhì),發(fā)現(xiàn)在40℃,pH7.0時(shí),該酯酶的活性最佳;常用有機(jī)溶劑對(duì)酯酶Est_3563的活性具有抑制作用;Zn2+、Mn2+、Ca2+和Mg2+對(duì)酯酶Est_3563的活性也有抑制作用,但Cu2+和Fe3+可以提高Est_3563的活力。同源建模構(gòu)建了 Est_3563的高級(jí)結(jié)構(gòu),軟件評(píng)估確定了該模型的可靠性。分子對(duì)接分析配體DBP和Est_3563的結(jié)合,結(jié)果表明DBP可以進(jìn)入蛋白的活性口袋。
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：X172

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本文編號(hào)：1261208