多氯聯(lián)苯(PCB)因其具有出色的穩(wěn)定性,絕緣性以及不易燃性而被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)當(dāng)中。多氯聯(lián)苯的積累會(huì)影響人類的健康,引起許多疾病,例如：癌癥、神經(jīng)性疾病、甲狀腺疾病以及免疫功能的缺失。環(huán)境中的多氯聯(lián)苯以及聯(lián)苯除了會(huì)對(duì)陸生及水生動(dòng)物造成一系列的危害以外,還會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng),影響細(xì)胞形態(tài),抑制微生物細(xì)胞分裂,甚至影響微生物蛋白質(zhì)的表達(dá)。紅球菌Rhodococcus sp. R04是一株聯(lián)苯降解菌株,本文以聯(lián)苯為唯一碳源培養(yǎng)紅球菌R04發(fā)現(xiàn),與對(duì)照相比,聯(lián)苯抑制紅球菌R04的生長(zhǎng),并且隨著培養(yǎng)基中聯(lián)苯濃度的增大存在劑量效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)以0.4mM Aroclors1221為碳源時(shí),與對(duì)照相比,紅球菌R04的生長(zhǎng)明顯受到抑制,并且延長(zhǎng)了對(duì)數(shù)期。使用顯微鏡對(duì)紅球菌R04不同時(shí)期菌體細(xì)胞進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),進(jìn)入對(duì)數(shù)期后紅球菌R04菌體出現(xiàn)絲狀化。當(dāng)培養(yǎng)基中聯(lián)苯濃度高達(dá)42mM時(shí)或者以0.4mM Aroclors1221為碳源時(shí),細(xì)胞分裂隔膜的形成受阻,菌體細(xì)胞絲狀化后最長(zhǎng)可達(dá)16μm。通過(guò)使用熒光顯微鏡對(duì)經(jīng)細(xì)胞膜染料FM1-43染色后紅球菌R04的生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),當(dāng)培養(yǎng)基中聯(lián)苯濃度劑量較低時(shí),細(xì)胞...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 多氯聯(lián)苯的危害
    1.2 多氯聯(lián)苯對(duì)微生物轉(zhuǎn)錄組的影響
    1.3 細(xì)菌氣囊蛋白
        1.3.1 氣囊蛋白分類
        1.3.2 氣囊結(jié)構(gòu)蛋白 GvpA和GvpC的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 氣囊蛋白的功能
        1.3.4 氣囊蛋白研究進(jìn)展
    1.4 細(xì)胞分裂蛋白FtsZ
    1.5 本課題研究目的和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 聯(lián)苯/PCB對(duì)紅球菌RO4細(xì)胞形態(tài)及分裂的影響
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、培養(yǎng)基和生長(zhǎng)條件
        2.1.2 主要的酶和化學(xué)試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 生物量試驗(yàn)
        2.2.2 紅球菌細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯微鏡觀察
        2.2.3 cDNA的獲得
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光PCR
        2.2.5 熒光光譜分析
        2.2.6 極化實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 Bp/PCB對(duì)紅球菌R04生長(zhǎng)的影響
        2.3.2 聯(lián)苯對(duì)紅球菌細(xì)胞形態(tài)及分裂的影響
        2.3.3 聯(lián)苯對(duì)紅球菌細(xì)胞膜著色熒光強(qiáng)度的影響
        2.3.4 紅球菌細(xì)胞膜的極化值
    2.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 紅球菌R04氣囊蛋白GvpA與GvpJ的定位
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 氣囊結(jié)構(gòu)蛋白gvpA與gvpJ基因的克隆和鑒定
        3.1.3 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.4 熒光顯微鏡觀察
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 氣囊結(jié)構(gòu)蛋白GvpA、GvpJ及綠色熒光蛋白的表達(dá)
        3.2.2 氣囊結(jié)構(gòu)蛋白的定位
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第四章 紅球菌R04氣囊蛋白的表達(dá)
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌株和生長(zhǎng)條件
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 主要化學(xué)試劑和儀器設(shè)備
        4.1.4 靜息細(xì)胞的制備
        4.1.5 紅球菌R04的培養(yǎng)
        4.1.6 總RNA的分離
        4.1.7 總RNA的純度檢測(cè)
        4.1.8 cDNA的獲得
        4.1.9 實(shí)時(shí)熒光PCR
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 紅球菌R04總RNA的分離
        4.2.2 RT-PCR結(jié)果
    4.3 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第五章 紅球菌氣囊蛋白生理功能的初步探究
    5.1 材料
        5.1.1 菌株與質(zhì)粒
        5.1.2 主要的酶和化學(xué)試劑
        5.1.3 主要培養(yǎng)基
        5.1.4 主要儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 紅球菌的培養(yǎng)
        5.2.2 紅球菌細(xì)胞形態(tài)顯微鏡觀察
        5.2.3 氣囊蛋白缺陷基因載體的構(gòu)建
        5.2.4 紅球菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)的制備
        5.2.5 氣囊蛋白GvpA的基因敲除
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 紅球菌R04的培養(yǎng)及靜置
        5.3.2 紅球菌細(xì)胞形態(tài)
        5.3.3 氣囊蛋白GvpA缺陷型載體的制備
        5.3.4 紅球菌氣囊蛋gvpA基因的同源重組
    5.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式



本文編號(hào)：3861966