隨著全球蝦產(chǎn)量的增加,蝦加工業(yè)迅速發(fā)展,蝦加工廢棄物的產(chǎn)量亦逐年增加,進(jìn)行合理回收利用,減輕、防止沿海近岸環(huán)境污染成為亟待解決問題。應(yīng)用生物技術(shù)實(shí)現(xiàn)蝦加工廢棄物的高附加值、綜合回收利用成為今后發(fā)展的方向。本研究用食藥用真菌以液體發(fā)酵的方式轉(zhuǎn)化蝦加工廢棄物,并用血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(ACE)酶活模型檢測(cè)了轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的抗高血壓活性;依次用Plackett-Burman(PB)設(shè)計(jì)、最陡爬坡實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計(jì)對(duì)轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了優(yōu)化;而后用醇沉、大孔樹脂吸附、萃取、凝膠柱層析、硅膠薄層層析等方法對(duì)有效成分進(jìn)行了分離純化;用液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS/MS)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC/MS)對(duì)有效成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,并以化學(xué)合成的方法獲得轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中豐度較高的兩種二肽化合物(Cys-Cys和Cys-Arg)。最后以固相合成法獲得了純化的Cys-Cys和Cys-Arg、驗(yàn)證了二者具有較高ACE抑制活性,并用分子模擬對(duì)接的方法探討了所得ACE抑制二肽抑制的作用機(jī)制。主要結(jié)果如下:建立了RP-HPLC法檢測(cè)馬尿酸(Hip)產(chǎn)量的色譜條件:流動(dòng)相乙腈水溶液(30:70,含0.2%的冰醋酸),流速1.0 mL/min的恒度洗脫,...

【文章頁數(shù)】：153 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 研究背景、目的和意義
        1.1.1 研究背景
        1.1.2 研究目的和意義
    1.2 蝦副產(chǎn)品及其回收再利用現(xiàn)狀
        1.2.1 制成肥料、生物農(nóng)藥和飼料
        1.2.2 提取活性物質(zhì)與營養(yǎng)成分
        1.2.3 發(fā)酵處理
    1.3 ACE與ACEI及其作用機(jī)理
        1.3.1 ACE的生理功能及結(jié)構(gòu)特征
        1.3.2 ACEI及其作用機(jī)制
        1.3.3 ACEI的活性檢測(cè)方法
    1.4 食藥用真菌與廢棄物處理及其ACEI
        1.4.1 食藥用真菌與固體廢棄物處理
        1.4.2 食藥用真菌的ACE抑制活性
    1.5 本文的研究內(nèi)容
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 本課題的技術(shù)路線
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及主要儀器設(shè)備
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 主要試劑及溶液
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要溶液的配制
    2.3 培養(yǎng)基及配制
        2.3.1 種子及菌種初步篩選培養(yǎng)基
        2.3.2 轉(zhuǎn)化液體培養(yǎng)基
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 蝦加工廢棄物的成分分析
        2.4.2 發(fā)酵條件
        2.4.3 ACEI的提取與分離
        2.4.4 ACE抑制活性的測(cè)定方法
        2.4.5 ACEI的分離純化
        2.4.6 ACEI的分子結(jié)構(gòu)鑒定
        2.4.7 ACEI的合成與活性驗(yàn)證
        2.4.8 ACE與ACE抑制二肽模擬對(duì)接
        2.4.9 數(shù)據(jù)整理與分析
第3章 ACE抑制活性測(cè)定方法的建立
    3.1 引言
    3.2 色譜條件的選擇
        3.2.1 確定Hip的特征吸收峰
        3.2.2 流動(dòng)相的選擇
        3.2.3 檢測(cè)方法的檢測(cè)效能分析
    3.3 ACE抑制試驗(yàn)體系的確定
        3.3.1 Hip萃取與未萃取檢測(cè)對(duì)比分析
        3.3.2 ACE和抑制劑作用時(shí)間的確定
        3.3.3 ACE抑制試驗(yàn)反應(yīng)體系的確定
    3.4 ACE抑制活性的測(cè)定方法的驗(yàn)證
    3.5 本章小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)化菌株的篩選
    4.1 引言
    4.2 蝦加工廢棄物基本成分分析
    4.3 轉(zhuǎn)化菌株的初步篩選
        4.3.1 菌絲體及水提物產(chǎn)量
        4.3.2 發(fā)酵產(chǎn)物水提物ACE抑制活性
    4.4 轉(zhuǎn)化菌種的優(yōu)選
        4.4.1 各菌種在轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中的生長
        4.4.2 各菌種的菌絲產(chǎn)量
        4.4.3 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物產(chǎn)量及其ACE抑制活性
    4.5 本章小結(jié)
第5章 食藥用真菌轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化
    5.1 引言
    5.2 褐絨蓋牛肝菌轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化
        5.2.1 顯著影響因素的篩選
        5.2.2 最大響應(yīng)區(qū)域的確定
        5.2.3 最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件的確定
        5.2.4 最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件的驗(yàn)證
    5.3 雞油菌轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化
        5.3.1 PB設(shè)計(jì)篩選顯著影響因素
        5.3.2 最陡爬坡實(shí)驗(yàn)確定響應(yīng)區(qū)域
        5.3.3 響應(yīng)面設(shè)計(jì)確定最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件
        5.3.4 轉(zhuǎn)化條件模型的驗(yàn)證試驗(yàn)
    5.4 本章小結(jié)
第6章 ACEI的結(jié)構(gòu)鑒定及活性驗(yàn)證
    6.1 引言
    6.2 ACEI的提取分離
        6.2.1 醇沉法富集ACEI
        6.2.2 超濾法富集ACEI
        6.2.3 大孔樹脂吸附法富集ACEI
        6.2.4 氯仿萃取法富集ACEI
        6.2.5 組分A凝膠柱層析分離
        6.2.6 組分B的硅膠層析分離
    6.3 ACEI的結(jié)構(gòu)鑒定
        6.3.1 組分B1的GC/MS分析
        6.3.2 組分A1的HPLC-MS/MS分析
    6.4 ACEI的活性驗(yàn)證
        6.4.1 Cys-Cys，Cys-Arg和Cys-Phe的化學(xué)合成
        6.4.2 Cys-Cys、Cys-Arg和Cys-Phe的ACE抑制活性
    6.5 ACE抑制二肽的作用機(jī)制
    6.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3828016