發(fā)布時(shí)間：2020-11-04 23:23

　　 赤潮的發(fā)生、發(fā)展和消亡等是當(dāng)前海洋生態(tài)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一,而對(duì)赤潮藻種類和數(shù)量的分析是其中的基礎(chǔ)內(nèi)容。除了傳統(tǒng)的顯微鏡觀察外,越來越多的新興技術(shù)正被引入這一領(lǐng)域并發(fā)揮著越來越重要的作用。 本研究利用S1酶能夠保護(hù)完全匹配的雙鏈核酸的性質(zhì),將分子生物學(xué)中的酶保護(hù)分析技術(shù)和夾心雜交技術(shù)融合在一起,創(chuàng)立了雙特異分子探針技術(shù)以實(shí)現(xiàn)對(duì)赤潮藻的檢測。該技術(shù)將酶保護(hù)分析探針(NPA探針)與細(xì)胞裂解液中的rRNA進(jìn)行雜交,再用S1酶處理(降解)不匹配的雙鏈雜合體和單鏈分子,然后采用微孔板夾心雜交技術(shù)測定保留下來的與rRNA分子等量匹配的NPA探針及其數(shù)量,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)微藻種類和數(shù)量的鑒定。本研究還從細(xì)胞破碎程度、酶保護(hù)分析和夾心雜交三個(gè)方面對(duì)諸多影響因素進(jìn)行條件優(yōu)化,最終建立了針對(duì)裸甲藻、紅色赤潮藻、海洋原甲藻、微小原甲藻、東海原甲藻、鏈狀亞歷山大藻、錐狀斯氏藻、旋鏈角毛藻、中肋骨條藻、尖刺擬菱形藻、圓海鏈藻和球形棕囊藻等7種甲藻、4種硅藻和1種定鞭藻的相關(guān)檢測曲線和方法,獲得了良好的特異性和靈敏度。將雙特異分子探針技術(shù)應(yīng)用于模擬樣品和現(xiàn)場樣品分析,取得了理想的檢測結(jié)果。 雙特異分子探針技術(shù)避免了核酸定量檢測技術(shù)一般需要的核酸純化步驟,將目標(biāo)生物的rRNA轉(zhuǎn)化為等量的互補(bǔ)DNA探針,既解決了RNA不穩(wěn)定易于降解的難題,又利用S1酶能夠降解單鏈DNA、RNA或不完全匹配的雙鏈核酸分子的特性,將探針的專一性從DNA探針與藻類的RNA雜交一個(gè)層次,提高到對(duì)雜交真實(shí)性進(jìn)行校驗(yàn)的第二個(gè)層次(也就是說特異結(jié)合的探針被保留,其它探針被分解),從根本上解決了探針種屬特異性的難題。本技術(shù)方法簡單,條件易于控制,不但滿足了微藻分析技術(shù)鑒定到種并且定量的要求,而且降低了關(guān)鍵探針的設(shè)計(jì)難度,使研發(fā)針對(duì)多種微藻并行分析的技術(shù)成為可能,為海洋微藻、特別是赤潮藻的快速、準(zhǔn)確、連續(xù)大面積觀測研究開辟了一條新路。
【學(xué)位單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類】：X173
【部分圖文】：

中肋骨條(0的分析曲線

鏈狀亞歷山大藻的分

球形棕囊藻的分析曲線
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔡卓平;段璐洋;肖群;段舜山;;風(fēng)浪擾動(dòng)促進(jìn)中肋骨條藻和球形棕囊藻增殖的模擬研究[J];海洋環(huán)境科學(xué);2011年04期

2 陳靜;王軍;趙穎;欒兆坤;;赤泥復(fù)合劑絮凝處理太湖水華藻與海洋赤潮藻[J];環(huán)境工程學(xué)報(bào);2011年09期

3 邵旻瑋;孫雪;徐年軍;;龍須菜對(duì)赤潮藻的生長抑制效應(yīng)及其與環(huán)境因子的關(guān)系[J];海洋學(xué)研究;2011年02期

4 李鋒民;單時(shí);胡忻雨;李揚(yáng);張明全;王震宇;;水生植物熱解生物油對(duì)中肋骨條藻的抑制作用[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2011年09期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 曹春暉;兩種赤潮藻對(duì)錳的生理生態(tài)響應(yīng)[D];中國海洋大學(xué);2010年

2 文世勇;基于營養(yǎng)鹽的赤潮災(zāi)害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估技術(shù)與應(yīng)用研究[D];大連海事大學(xué);2010年

3 王進(jìn)河;兩種赤潮微藻與兩種輪蟲相互作用對(duì)氣候因子變化響應(yīng)的實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

4 周媛;指狀許水蚤與赤潮微藻相互作用的實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

5 張清春;東海大規(guī)模甲藻赤潮種吞噬特性及其在赤潮形成中的作用初探[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2011年

6 雷惠;基于固有光學(xué)量的東海赤潮遙感提取算法研究[D];浙江大學(xué);2011年

7 齊紅菊;利用葉綠素?zé)晒夥椒z測浮游植物營養(yǎng)鹽限制及跟蹤赤潮生消的研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

8 張寶玉;赤潮藻的分子標(biāo)識(shí)及熒光原位雜（FISH）技術(shù)在檢測赤潮藻中的應(yīng)用[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2005年

9 袁健;東海三種重要赤潮藻熒光定量PCR檢測技術(shù)的建立和應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2012年

10 張前前;東海典型赤潮藻檢測的熒光光譜特征研究[D];中國海洋大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 龐勇;珠江口海區(qū)環(huán)境特征及雙胞旋溝藻赤潮發(fā)生過程的研究[D];暨南大學(xué);2010年

2 王洪超;船舶壓載水引發(fā)赤潮風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)價(jià)方法研究[D];大連海事大學(xué);2010年

3 吳紹淵;骨條藻赤潮后赤潮過程的三維熒光特征與生態(tài)學(xué)分析[D];華東師范大學(xué);2010年

4 呂桂才;溶解有機(jī)物三維熒光光譜結(jié)合多變量分析在赤潮藻識(shí)別中的應(yīng)用[D];中國海洋大學(xué);2010年

5 張樂;膠州灣常見赤潮藻脂肪酸的動(dòng)力學(xué)研究及其應(yīng)用[D];青島理工大學(xué);2010年

6 張萬禎;流式圖像赤潮監(jiān)測儀光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)[D];福建師范大學(xué);2010年

7 賴海燕;典型赤潮藻對(duì)氨基酸的利用特性研究[D];暨南大學(xué);2011年

8 劉苓;不同營養(yǎng)條件對(duì)赤潮藻碳和氮穩(wěn)定同位素組成的影響[D];大連海事大學(xué);2012年

9 張璇;長江口及鄰近海域營養(yǎng)鹽的歷史演變及其在赤潮中的作用研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

10 王麗媛;磁性殼聚糖復(fù)合微球?qū)Τ喑碑悶吃澹℉eterosigma akashiwo）抑制作用的研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2870760