【摘要】： 第二松花江中的氯代烴類污染物種類較多、結(jié)構(gòu)多樣,且絕大多數(shù)具有毒性大、難降解、易于生物富集等特點,并且可通過食物鏈的生物放大作用對其它的生物,甚至對人類產(chǎn)生危害。對水環(huán)境污染進行修復(fù)以降低風(fēng)險和防止這類物質(zhì)通過人類產(chǎn)生的各種廢物進入環(huán)境是防治氯代烴類污染物污染水體的兩個重要研究方面。微生物在降解轉(zhuǎn)化這類物質(zhì),使其脫毒和無害化方面具有獨特的地位。本文采用富集技術(shù),分離純化出了對氯代烴類化合物具有較強降解活性的降解菌株,利用分子生物學(xué)手段進行了鑒定,研究了菌株在純培養(yǎng)、礫間接觸氧化法和微宇宙模擬系統(tǒng)中的降解活性和特點,主要結(jié)論如下: (1)通過選擇性富集培養(yǎng)技術(shù)分別分離出了對氯苯、硝基苯和六氯丁二烯具有很好降解性能的菌株CB001、NB001和HL1。通過菌落特征觀察,部分生理生化指標(biāo)的測定,16S rDNA序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析,分別被鑒定為Acinetobacter calcoaceticus、Pseudomonas putida、Serratia marcescens。 (2)菌株CB001和HL1降解各自基質(zhì)的最佳pH值范圍為7.0—8.0,菌株NB001降解基質(zhì)的最佳pH值范圍為7.0—7.5。菌株CB001、NB001和HL1降解基質(zhì)的共同最佳溫度范圍為25.0℃—30.0℃;菌株CB001在溫度為40.0℃時,仍然能夠保持較高的降解活性;三株降解菌在低溫條件下經(jīng)過一段時間的適應(yīng),對基質(zhì)表現(xiàn)出很好的的降解潛力。馴化對菌株降解基質(zhì)的效率產(chǎn)生重要的影響作用。 (3)純培養(yǎng)條件下,菌株的生長都經(jīng)歷了遲緩期、加速期、對數(shù)期和穩(wěn)定期等過程,基質(zhì)濃度的變化程度同樣經(jīng)歷了緩慢、快速、緩慢的過程,其中菌株CB001和NB001在對數(shù)生長末期時對基質(zhì)的降解速率最大。菌株CB001降解氯苯的過程中伴隨著氯離子的釋放,釋放量基本符合化學(xué)計量關(guān)系,其粗酶液中鄰苯二酚1,2-雙加氧酶的活性非常高,推斷菌株CB001是通過鄰位開環(huán)裂解途徑降解氯苯。菌株NB001降解硝基苯的過程中伴隨著亞硝酸根離子的釋放,亞硝酸根離子的釋放量和硝基苯降解量之比的范圍在0.42—0.63之間,制備的粗酶液中鄰苯二酚2,3-雙加氧酶的活性非常高,推斷菌株NB001通過間位開環(huán)裂解途徑降解硝基苯。菌株HL1降解六氯丁二烯的的過程中伴隨著氯離子的釋放,但釋放量偏離化學(xué)計量關(guān)系。三株降解菌在純培養(yǎng)條件下,對基質(zhì)的降解過程均符合一級動力學(xué)方程,氯苯、硝基苯、六氯丁二烯的一級反應(yīng)速率常數(shù)最大值分別為0.0376 h~(-1)、0.0330 h~(-1)和0.0237 h~(-1),生物降解半衰期最小值分別為18.43 h、21.00h和29.24 h。 (4)葡萄糖對菌株HL1降解能力的促進作用強于對菌株CB001和NB001降解能力的促進作用,共代謝是葡萄糖提高菌株HL1對各基質(zhì)降解能力的一個重要機制。葡萄糖可增加降解體系中氯離子的釋放量,但對亞硝酸離子的釋放量起到一定的削減作用。 (5)在單一基質(zhì)條件下,菌株CB001對其它氯苯類化合物的降解能力大小順序為:1,3-二氯苯＞1,2-二氯苯＞1,4-二氯苯＞1,2,3-三氯苯＞1,2,4-三氯苯＞六氯苯;菌株NB001對其它硝基苯類化合物的降解能力順序為:2-硝基甲苯＞3-硝基甲苯＞4-硝基甲苯＞2,4-二硝基甲苯＞2,6-二硝基甲苯;菌株HL1對三氯乙烯的降解能力大于對四氯乙烯的降解能力。菌株NB001和CB001的混合菌對氯代硝基苯類化合物作為單一基質(zhì)或共存條件下均產(chǎn)生一定的降解作用,降解能力的大小為:間氯硝基苯＞對氯硝基苯＞鄰氯硝基苯。 (6)直接利用從松花江中采集的礫石進行掛膜,菌膜對江水中的基質(zhì)的去除起到了明顯的作用,其中對六氯丁二烯的降解能力最強;菌膜對基質(zhì)的去除能力隨著培養(yǎng)溫度的升高而增強,但在低溫環(huán)境下經(jīng)過適應(yīng)后,對基質(zhì)也可產(chǎn)生一定的降解效果。礫石表面吸附和江水中的微生物對系統(tǒng)中基質(zhì)的去除起到了積極的促進作用。 (7)底泥明顯促進了微宇宙模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的生物降解效果,其中對六氯丁二烯降解的促進作用最明顯,并且在降解初期和降解后期的貢獻作用較大。光照對微宇宙模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的去除具有一定的作用,其中對于氯苯和硝基苯降解的促進作用最明顯。微宇宙模擬系統(tǒng)中基質(zhì)濃度的降低主要是由于生物降解導(dǎo)致的,其中馴化分離的降解菌的降解作用明顯大于水體中其它降解菌的降解作用,降解菌在模擬系統(tǒng)中有著較強的定殖能力,基質(zhì)的存在有利于保持菌株在數(shù)量上的優(yōu)勢,但無基質(zhì)存在的情況下,在一定時間內(nèi)仍可保持?jǐn)?shù)量上的優(yōu)勢,相比而言,菌株HL1的定殖能力稍差。溫度在25—30℃之間時,模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的消失隨著溫度的升高而增加,但在低溫環(huán)境下,延長培養(yǎng)時間后發(fā)現(xiàn)菌株對基質(zhì)仍然可產(chǎn)生明顯的降解效果。降解初期,懸浮物對微宇宙模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的去除發(fā)揮著重要的作用,對于菌株HL1而言,這種促進作用可保持到降解末期,但對于菌株CB001和NB001而言,從降解中期開始,這種促進作用逐漸降低。 (8)Cd~(2+)和Hg~(2+)的濃度達到5.0 mg/L時,對兩種模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的降解均產(chǎn)生一定的影響,達到10.0 mg/L時,分別產(chǎn)生顯著和極顯著的抑制作用,其中Hg~(2+)的抑制作用大于Cd~(2+)的抑制作用。兩種模擬系統(tǒng)中,營養(yǎng)鹽的加入對基質(zhì)降解起到了明顯的促進作用。對于礫間接觸氧化法模擬系統(tǒng),這種促進作用隨著營養(yǎng)物質(zhì)加入量的增加而增強。在微宇宙模擬系統(tǒng)中,營養(yǎng)鹽的加入量達到一定程度時,降解率不再隨營養(yǎng)程度的增加而明顯增加,營養(yǎng)鹽的加入對六氯丁二烯降解的促進作用最低。 (9)經(jīng)過一定適應(yīng)程序的馴化,菌株CB001對兩種模擬系統(tǒng)中共存條件下的氯苯、1,3-二氯苯、1,2-二氯苯、1,4-二氯苯和菌株NB001對共存體系中的硝基苯、2-硝基甲苯、3-硝基甲苯、4-硝基甲苯、2,4-二硝基甲苯、2,6-二硝基甲苯均具有一定的降解效果,其中對單硝基甲苯類化合物的降解能力強于對雙硝基甲苯類化合物的降解能力。在兩種模擬系統(tǒng)中,菌株NB001和CB001的混合物對氯代硝基苯類化合物都保持著較好的降解效果。菌株HL1對共存體系中的六氯丁二烯、三氯乙烯和四氯乙烯的降解效果最好。菌株CB001、NB001和其混合菌株在微宇宙模擬系統(tǒng)中對基質(zhì)的降解效果強于礫間接觸氧化法模擬系統(tǒng),而菌株HL1則剛好相反。三株降解菌的混合物對共存的可被降解的氯代烴類化合物的降解能力大小順序為:氯代烯烴類化合物的降解效果最好,其次為氯苯類化合物,氯代硝基苯和硝基苯的降解效果最差。
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：X522
【圖文】：

體積為830d，江水/底泥 =5.5:1(v/v)。生物降解過程中，降解菌的初始濃度大約為3、10scFu/tnl，光暗比為10:14，并用攪拌器在水面下 2.0cm處輕輕攪動，不要攪動污泥，以便更準(zhǔn)確地模擬松花江水體(見圖2一l)。二二二土士乒北產(chǎn) 產(chǎn)二二二二二二二二2弓省 省卜卜--——一—一一—月月‘‘ ...攪拌器江水降解菌底泥菌月妒一二二圣二告二二二 二湊湊韶8ors韶8韶888韶8咫 咫微宇宙模擬系統(tǒng)礫間接觸氧化法模擬系統(tǒng)圖2一l生物修復(fù)模擬系統(tǒng)示意圖Fig.2一 1Sehematiedlagran招 oftheslrnulatedbioremediationsystem2.3.3礫間接觸氧化法模擬系統(tǒng)中基質(zhì)的生物降解本實驗使用的菌株和基質(zhì)為單一菌株和菌株馴化時所用的單一基質(zhì)。2.3.3.1模擬系統(tǒng)的組成和結(jié)構(gòu)對生物降解的影響(1)掛菌膜的不同礫石對基質(zhì)降解的影響:分別將經(jīng)過處理和未經(jīng)過處理的掛有菌膜的礫石和實驗用江水以體積比為1:4的比例進行組合，加入模擬系統(tǒng)中，基質(zhì)的初始濃度大約為50.0m留L。于25.0℃下培養(yǎng)，在規(guī)定的時間內(nèi)采集水面下 2.0cm處的水樣，分析基質(zhì)的濃度，計算出降解率。(2)菌膜和礫石對模擬系統(tǒng)中基質(zhì)降解的作用:分別將無菌膜和掛有菌膜的未經(jīng)處理的礫石加入模擬系統(tǒng)中，同時做不加礫石，只加入基質(zhì)的對照處理�；|(zhì)的初始濃度大約為50.om酬L，25.0℃培養(yǎng)，在規(guī)定的時間內(nèi)取水面下 2.0cm處的水樣

3.2.2165rDNA序列同源性分析采用通用引物對所馴化和純化的三株細菌CB001、NB001和HLI的 165rDNA基因進行了PCR擴增，分別獲得了具有單一條帶的擴增產(chǎn)物，如圖3一1所示，其大小分別約為 1450bp，與預(yù)期大小相符。2000圖3一l菌株CB001、NBO01和HLI的 165:nNAPCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖0，l淚性對照l，菌株CB001的 165rDNAPCR產(chǎn)物2，菌株NBOOI的16SrDNAPCR產(chǎn)物M，DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DL20003，菌株HLI的 165rDNAPCR產(chǎn)物Fig.3一 1.AgamsegeleleetroPhoresisofthePCRProduetsofStrainCBOOI

東北師范大學(xué)博士學(xué)位論文(l)菌株CBool對氯苯類化合物的降解菌株CBO01對氯苯及其同類物質(zhì)的降解及其氯離子的釋放如圖3一18。以氯苯類化合物為唯一碳源和能源的培養(yǎng)條件下，菌株對不同基質(zhì)的降解能力隨著氯取代基的增加而降低，其中對二氯苯表現(xiàn)出了較高的降解能力，基質(zhì)的降解率在69.4%一82.8%之間，但對三氯苯和六氯苯的降解能力較低，其中對六氯苯的降解率只有6.5%，幾乎沒有降解活性。這可能由于氯原子有很強的吸電子性，苯環(huán)的電子云密度降低，親電的氧化酶很難從苯環(huán)上獲得電子而發(fā)生氧化反應(yīng)，氯取代基越多，苯環(huán)上的電子云密度越低，越難被氧化。將loom留L葡萄糖作為初級營養(yǎng)基質(zhì)加入到培養(yǎng)體系后

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 何海洋;張文靜;谷小溪;;人工回灌條件下地下環(huán)境要素對氯苯生物降解行為的影響研究[J];長江科學(xué)院院報;2012年07期

2 徐鳳宇;李影;胡靜濤;單曉楓;馬紅霞;;黏質(zhì)沙雷菌——實驗教學(xué)用良好菌種[J];畜牧與飼料科學(xué);2012年03期

3 徐鳳宇;么乃全;高云航;胡靜濤;馬紅霞;;黏質(zhì)沙雷菌應(yīng)用研究進展[J];畜牧與飼料科學(xué);2012年Z1期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張巖;1，2，4-三氯苯在垃圾污染地下水中的遷移轉(zhuǎn)化機理及其模擬預(yù)測研究[D];吉林大學(xué);2011年

本文編號：2789817