【摘要】：受體報(bào)告基因試驗(yàn)也稱受體轉(zhuǎn)錄激活試驗(yàn),是EPA推薦的用于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EEDs)篩選的In vitro方法之一。受體報(bào)告基因試驗(yàn)是以受體介導(dǎo)理論為基礎(chǔ),應(yīng)用基因重組技術(shù),將報(bào)告基因置于外源性激素效應(yīng)元件(HRE)的調(diào)控之下,構(gòu)建重組報(bào)告基因載體,應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi),通過檢測EEDs作用下報(bào)告基因編碼的酶活性或蛋白表達(dá)的變化,間接反映內(nèi)源性基因的表達(dá)情況。研究表明,這種方法既可檢測化學(xué)物與受體的結(jié)合能力,又可檢測結(jié)合后引起的生物學(xué)效應(yīng),而且能夠區(qū)分激動劑和拮抗劑,與受體結(jié)合試驗(yàn)相比可提供更多的信息,因此成為EEDs篩選的有力工具。本研究將受雄激素效應(yīng)元件(ARE)、雌激素效應(yīng)元件(ERE)調(diào)控的重組報(bào)告基因質(zhì)粒和相應(yīng)表達(dá)雄激素受體(AR)、雌激素(ER)的質(zhì)粒分別共轉(zhuǎn)染非洲猴腎細(xì)胞株CV-1,建立AR、ER報(bào)告基因試驗(yàn)。
【圖文】：

發(fā)光法或甄瑞A法側(cè)定圖2受體報(bào)告基因試驗(yàn)原理用基因重組技術(shù)，將報(bào)告基因置于外源性HRE的調(diào)控之下，，構(gòu)建重組報(bào)告基質(zhì)粒，同時(shí)構(gòu)建受體表達(dá)質(zhì)粒，應(yīng)用基因共轉(zhuǎn)染技術(shù)將兩種載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。某些激素或具有激素活性的化學(xué)物作為一種配體，特異地與受體結(jié)合形成配一受體復(fù)合物，hPs解離，受體發(fā)生構(gòu)象改變并二聚體化。這種二聚體化的復(fù)合與重組報(bào)告基因質(zhì)粒中的HRE結(jié)合，激活報(bào)告基因，觸發(fā)基因轉(zhuǎn)錄形成RNA，mRNA進(jìn)一步翻譯為蛋白質(zhì)，通過檢測報(bào)告基因編碼的酶活性或蛋白表的變化，可以間接反映EEDS作用下內(nèi)源性基因的表達(dá)情況。

psv一p一Gal質(zhì)粒圖譜
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：X503

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃敏毅;張育輝;段仁燕;;鎘的環(huán)境激素效應(yīng)研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2007年05期

2 龔家瑋;利用藥物抗性標(biāo)記和報(bào)告基因?qū)︶劸平湍冈|(zhì)體融合的雜合子進(jìn)行有效篩選[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2005年02期

3 張志仁,徐順清,周宜開,任恕,劉志偉;蟲熒光素酶報(bào)告基因用于二VA英類化學(xué)物質(zhì)的檢測[J];分析化學(xué);2001年07期

4 門晶;接晶;高學(xué)軍;李慶章;;靶向奶牛Lepr基因的miR-30d報(bào)告基因載體構(gòu)建及靶向驗(yàn)證[J];中國乳品工業(yè);2011年05期

5 蔡漢成;尹端l

本文編號：2645072