目的:構(gòu)建及比對分屬于激活和抑制型中的不同核糖開關(guān)的調(diào)控功效,為實現(xiàn)基因電路的精準(zhǔn)調(diào)控奠定基礎(chǔ);利用多元基因調(diào)控元件設(shè)計布爾邏輯門模型構(gòu)建基因電路,引入復(fù)雜的邏輯運(yùn)算實現(xiàn)目的基因表達(dá)的精確調(diào)控,進(jìn)而優(yōu)化特定的代謝途徑。方法:1、構(gòu)建由不同核糖開關(guān)（addA與M6,TPP與btuB）調(diào)控的綠色熒光蛋白amcyan表達(dá)載體,將目的載體轉(zhuǎn)入MG1655菌株中,通過熒光表達(dá)量、RT-qPCR分析在不同IPTG濃度誘導(dǎo)下的amcyan表達(dá),與未含有IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)載體的表達(dá)量進(jìn)行比較,選擇合適的IPTG濃度對后續(xù)實驗進(jìn)行調(diào)控;在上述優(yōu)化后的IPTG濃度誘導(dǎo)下,對于不同核糖開關(guān)添加相對應(yīng)的配體物,并以不同的配體物濃度去調(diào)控綠色熒光蛋白amcyan的表達(dá),選擇出addA與M6,TPP與btuB核糖開關(guān)的最佳配體物誘導(dǎo)濃度,并進(jìn)行動態(tài)調(diào)控效能分析。2、構(gòu)建基因電路邏輯門模型,在雙載體電路中利用lac啟動子,核糖開關(guān)（M6,addA,TPP,btuB,LysC,c-di-GMP）,噬菌體tR1轉(zhuǎn)錄終止子,Pbe啟動子、受控基因(pleD,lysC^for)及報道基因amcyan組建... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

lac-btuB-amcyan融合片段凝膠電泳Figure1-1Thegelelectropherogramsoflac-btuB-amcyanfusionfragments

菌株pVA單克隆平板Figure1-3ThemonoclonalplateofstrainpVA

不同時間段熒光強(qiáng)度檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]環(huán)二鳥苷單磷酸核糖開關(guān)的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 李新風(fēng),陳芳,肖金鳳,何進(jìn).  生物工程學(xué)報. 2017(09)



本文編號：3084952