AtPAP2基因是擬南芥花青素生物合成途徑中的重要調(diào)控基因,為了實(shí)現(xiàn)該基因在煙草中的高效表達(dá),從擬南芥中分離克隆出了AtPAP2基因并構(gòu)建了植物表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的侵染方法,將該基因成功轉(zhuǎn)入到煙草受體材料中,并獲得了紫色的轉(zhuǎn)基因煙草植株,相對(duì)于野生型煙草,該煙草在根、莖、葉等組織上均表現(xiàn)出不同程度的紫色。進(jìn)一步的qRT-PCR分析結(jié)果表明,在花青素生物合成途徑中,AtPAP2基因的表達(dá)可以上調(diào)從4-香豆酰CoA到最終合成花青素過(guò)程中的相關(guān)基因,促進(jìn)了合成反應(yīng)的進(jìn)行,對(duì)花青素的合成具有重要的作用。該研究對(duì)于揭示AtPAP2基因的作用以及煙草花青素合成途徑相關(guān)基因的調(diào)節(jié)機(jī)理具有重要的意義。

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圖1 花青素生物合成途徑

利用RNA提取試劑盒從擬南芥的葉片中提取總RNA(圖2A),以表1中pPAP2-F和pPAP2-R為特異性引物,擬南芥總RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了AtPAP2基因,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示,獲得的目的基因條帶約為750bp,與預(yù)期AtPAP2基....

圖2 擬南芥葉片總RNA提取和AtPAP2基因克隆

圖1花青素生物合成途徑2.2植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌

圖3 植物表達(dá)載體pGNP-PAP2的構(gòu)建圖譜

根據(jù)圖3所示的植物表達(dá)載體圖譜進(jìn)行載體構(gòu)建。先提取pMD18T-PAP2菌液的質(zhì)粒DNA,與植物表達(dá)載體pGNP的質(zhì)粒DNA同時(shí)用限制性內(nèi)切酶BstXI和KpnI進(jìn)行酶切,用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并分別切膠純化回收AtPAP2目的片段和pGNP載體的大片段(圖4)。利用T4....

圖4 載體pMD18-AtPAP2雙酶切產(chǎn)物

作為植物類黃酮合成途徑的一個(gè)分支途徑,花青素的生物合成已經(jīng)在模式植物中進(jìn)行了較多研究。研究結(jié)果表明花青素合成的前體物質(zhì)是苯丙氨酸,在一系列基因的調(diào)控下,苯丙氨酸經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)最終形成花青素。為了研究擬南芥AtPAP2基因在煙草植株中的表達(dá)情況,該研究提取了轉(zhuǎn)基因煙草葉片的總R....

本文編號(hào)：4026048