花青素合成轉(zhuǎn)錄因子PAP2植物表達(dá)載體構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化
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【部分圖文】:
圖1 花青素生物合成途徑
利用RNA提取試劑盒從擬南芥的葉片中提取總RNA(圖2A),以表1中pPAP2-F和pPAP2-R為特異性引物,擬南芥總RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了AtPAP2基因,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示,獲得的目的基因條帶約為750bp,與預(yù)期AtPAP2基....
圖2 擬南芥葉片總RNA提取和AtPAP2基因克隆
圖1花青素生物合成途徑2.2植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌
圖3 植物表達(dá)載體pGNP-PAP2的構(gòu)建圖譜
根據(jù)圖3所示的植物表達(dá)載體圖譜進(jìn)行載體構(gòu)建。先提取pMD18T-PAP2菌液的質(zhì)粒DNA,與植物表達(dá)載體pGNP的質(zhì)粒DNA同時(shí)用限制性內(nèi)切酶BstXI和KpnI進(jìn)行酶切,用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并分別切膠純化回收AtPAP2目的片段和pGNP載體的大片段(圖4)。利用T4....
圖4 載體pMD18-AtPAP2雙酶切產(chǎn)物
作為植物類黃酮合成途徑的一個(gè)分支途徑,花青素的生物合成已經(jīng)在模式植物中進(jìn)行了較多研究。研究結(jié)果表明花青素合成的前體物質(zhì)是苯丙氨酸,在一系列基因的調(diào)控下,苯丙氨酸經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)最終形成花青素。為了研究擬南芥AtPAP2基因在煙草植株中的表達(dá)情況,該研究提取了轉(zhuǎn)基因煙草葉片的總R....
本文編號(hào):4026048
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