哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育受眾多信號(hào)通路以及轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。卵母細(xì)胞的成熟需要經(jīng)過(guò)兩次減數(shù)分裂過(guò)程,在減數(shù)分裂過(guò)程中,MAPK信號(hào)通路參與了調(diào)控紡錘體的組裝和染色體的正常排列。受精后的胚胎即進(jìn)入著床前發(fā)育階段,該階段包括兩個(gè)關(guān)鍵過(guò)程,一個(gè)是合子基因組激活,該過(guò)程是由母源調(diào)控向胚胎調(diào)控轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵時(shí)期。早期胚胎發(fā)育的另一個(gè)重要過(guò)程是桑椹胚-囊胚轉(zhuǎn)換,該過(guò)程會(huì)出現(xiàn)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)以及滋養(yǎng)層的分化。轉(zhuǎn)錄因子以及表觀修飾因子在這兩個(gè)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵調(diào)控因子在卵母細(xì)胞成熟或早期胚胎發(fā)育中所發(fā)揮的作用是揭示發(fā)育過(guò)程復(fù)雜性和系統(tǒng)性的基礎(chǔ)。甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶II(MATII)是哺乳動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行甲硫氨酸代謝的關(guān)鍵復(fù)合物,它是由催化亞基α以及調(diào)控亞基β組成。其中,α亞基是由MAT2A基因編碼而成;β亞基是由MAT2B基因編碼而成。該復(fù)合物通過(guò)催化甲硫氨酸形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)進(jìn)而與機(jī)體轉(zhuǎn)甲基代謝通路緊密相關(guān),同時(shí)SAM也是生物體內(nèi)甲基基團(tuán)的最主要來(lái)源。MAT2A和MAT2B蛋白廣泛分布于生物體的多種細(xì)胞類(lèi)型中,參與了體內(nèi)眾多DNA與組蛋白甲基化修飾。本研究通過(guò)篩選及功能分析,對(duì)MAT2A...

【文章頁(yè)數(shù)】：122 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
綜述部分
    第一章 卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育
        1.1 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程及調(diào)控機(jī)制
            1.1.1 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程
            1.1.2 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂調(diào)控
        1.2 早期胚胎發(fā)育的合子基因組激活
            1.2.1 合子基因組激活的時(shí)間
            1.2.2 合子基因組激活的機(jī)制
            1.2.3 母源mRNA的翻譯
            1.2.4 母源mRNA的清除
            1.2.5 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子
            1.2.6 染色質(zhì)重塑
        1.3 囊胚的形成和發(fā)育
            1.3.1 致密化和極化的發(fā)生
            1.3.2 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層的形成
            1.3.3 囊胚期組蛋白修飾
    第二章 MAT2A及 MAT2B的研究進(jìn)展
        2.1 MAT2A研究進(jìn)展
        2.2 MAT2B研究進(jìn)展
        2.3 甲硫氨酸代謝調(diào)控
        2.4 甲硫氨酸代謝與DNA甲基化
        2.5 早期胚胎發(fā)育的甲硫氨酸供給
        2.6 研究目的和意義
試驗(yàn)部分
    第三章 MAT2A和MAT2B在HEPG2及LO2細(xì)胞中的表達(dá)和定位
        3.1 材料和試劑
            3.1.1 主要材料
            3.1.2 主要試劑
        3.2 方法
            3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.2 RNA提取
            3.2.3 反轉(zhuǎn)錄與實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.2.4 基因擴(kuò)增與載體構(gòu)建
            3.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            3.2.6 細(xì)胞免疫熒光染色
            3.2.7 蛋白免疫印跡檢測(cè)
            3.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 MAT2A和MAT2B在HepG2以及LO2細(xì)胞系中的表達(dá)
            3.3.2 MAT2A和MAT2B在HepG2以及LO2細(xì)胞系中的定位
            3.3.3 MAT2A和MAT2B過(guò)表達(dá)影響其亞細(xì)胞分布
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 MAT2B調(diào)控小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟
        4.1 材料和試劑
            4.1.1 主要材料
            4.1.2 主要試劑
        4.2 方法
            4.2.1 卵母細(xì)胞及受精卵的采集和培養(yǎng)
            4.2.2 卵母細(xì)胞顯微注射
            4.2.3 胚胎實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            4.2.4 胚胎免疫熒光染色
            4.2.5 MAT2B及 GIT1 過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
            4.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)
            4.2.7 蛋白質(zhì)免疫共沉淀
            4.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 MAT2B在卵母細(xì)胞期高表達(dá)
            4.3.2 敲降MAT2B對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
            4.3.3 MAT2B與 GIT1 互作并激活MAPK通路
            4.3.4 U0126 處理對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響
            4.3.5 敲降MAT2B影響紡錘體排列和母源mRNA降解
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 MAT2A在小鼠合子基因組激活中的功能研究
        5.1 材料和試劑
            5.1.1 主要材料
            5.1.2 主要試劑
        5.2 方法
            5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            5.2.2 組織RNA提取
            5.2.3 小鼠卵母細(xì)胞及胚胎的采集與培養(yǎng)
            5.2.4 mRNA反轉(zhuǎn)錄
            5.2.5 蛋白免疫印跡檢測(cè)
            5.2.6 胚胎顯微注射
            5.2.7 胚胎免疫熒光染色
            5.2.8 胚胎實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            5.2.9 體外轉(zhuǎn)錄
            5.2.10 胚胎轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 MAT2A及 MAT2B在小鼠多組織中的表達(dá)模式
            5.3.2 MAT2A及 MAT2B在小鼠卵母細(xì)胞及早期胚胎中的表達(dá)模式
            5.3.3 免疫熒光檢測(cè)MAT2A在小鼠早期胚胎中的分布模式
            5.3.4 MAT2A干擾RNA的驗(yàn)證
            5.3.5 敲降MAT2A導(dǎo)致小鼠2-細(xì)胞胚胎阻滯
            5.3.6 敲降MAT2A對(duì)2-細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平的影響
            5.3.7 胚胎發(fā)育挽救實(shí)驗(yàn)
            5.3.8 細(xì)胞水平敲降MAT2A后影響組蛋白甲基化修飾
            5.3.9 敲降MAT2A后對(duì)2細(xì)胞胚胎組蛋白甲基化的影響
            5.3.10 敲降MAT2A后導(dǎo)致2細(xì)胞胚胎DNA損傷
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
    第六章 MAT2A在小鼠囊胚發(fā)育中的功能研究
        6.1 材料和試劑
            6.1.1 主要材料
            6.1.2 主要試劑
        6.2 方法
            6.2.1 小鼠胚胎獲取
            6.2.2 小鼠胚胎培養(yǎng)
            6.2.3 胚胎免疫熒光染色
            6.2.4 胚胎實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            6.2.5 MAT2A催化位點(diǎn)突變載體構(gòu)建
            6.2.6 體外轉(zhuǎn)錄
            6.2.7 胚胎顯微注射
            6.2.8 胚胎凋亡染色
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 環(huán)亮氨酸處理對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            6.3.2 環(huán)亮氨酸處理對(duì)組蛋白甲基化修飾的影響
            6.3.3 甲硫氨酸饑餓培養(yǎng)對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            6.3.4 甲硫氨酸饑餓培養(yǎng)對(duì)組蛋白甲基化修飾的影響
            6.3.5 MAT2A催化突變體對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            6.3.6 抑制MAT2A催化活性對(duì)胚胎凋亡的影響
            6.3.7 抑制MAT2A催化活性對(duì)囊胚細(xì)胞數(shù)的影響
            6.3.8 抑制MAT2A催化活性對(duì)囊胚基因表達(dá)的影響
        6.4 討論
        6.5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
不足之處和進(jìn)一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4028455