脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和附屬結構是革蘭氏陰性菌的膜壁結構組成部分,這些非必需結構消耗了大量的原料和能量。本課題以大腸桿菌（Escherichia coli K-12）和惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida KT2442）為出發(fā)菌,建立了適用于基因組精簡的敲除系統(tǒng),構建了一系列膜壁結構精簡菌株,解析了膜壁結構關鍵分子對細菌細胞全局影響機制,并利用一些精簡菌株作為宿主生產(chǎn)可降解生物塑料聚羥基脂肪酸酯（PHA）。本論文主要研究結論如下:（1）通過刪除LPS合成關鍵基因rfaD構建了大腸桿菌LPS結構精簡菌株,合成最簡LPS結構,即Kdo₂-lipid A,并通過基因工程改造提高Kdo₂-lipid A合成量。在大腸桿菌K-12菌中,通過敲除核心糖中L-D-庚糖合成關鍵基因rfaD,獲得LPS分子結構精簡菌株WJW00。通過SDS-PAGE銀染,薄板層析,和電噴霧電離質譜鑒定其LPS結構為Kdo₂-lipid A。WJW00合成1.31μM（2.94μg/mL）的Kdo₂

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-2大腸桿菌K-12中Kdo2-lipidA結構及合成[11,12]

圖1-2大腸桿菌K-12中Kdo2-lipidA結構及合成[11,12]Fig.1-2StructureandbiosynthesisofKdo2-lipidAinE.coliK-12[11,12]1.1.3多糖鏈分子的合成途徑及其功能L....

圖1-6基于多種重組系統(tǒng)復合的微生物基因組精簡策略[69]

第一章緒論微生物基因組中不保守的必需基因往往與細胞獨特的結構和功能有關。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的主要區(qū)別在于細胞膜壁結構和組成成分，二者基因組中與膜壁相關的必需基因也存在較大差異[87]。微生物必需基因的保守性與其所編碼蛋白在細胞中的作用密切相關。多數(shù)微生物的必需基因所編碼....

圖1-8PHA的生物合成途徑Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.

圖1-8PHA的生物合成途徑Fig.1-8Polyhydroxyalkanoate(PHA)synthesispathway.2聚羥基脂肪酸酯的代謝改造研究進展在大腸桿菌中表達phbCAB三個基因即可合成聚3-羥基丁酸酯（xybutyrate,PHB）。....

圖2-6ptsO基因敲除和lpxC、msbA表達的凝膠電泳驗證圖

圖2-5重組質粒pWSK29-lpxC（b）、pWSK29-lpxC（c）和pWSK29-lpxC-msbA（d）的質粒圖譜Fig.2-5ThemapsofpWSK29-lpxC(b),pWSK29-lpxC(c)andpWSK29-lpxC-msbA(d....

本文編號：4026009