CHRONO是核心生物鐘元件,對于CHRONO結(jié)構(gòu)和功能的研究是本課題研究的主要目的。本篇論文主要圍繞CHRONO的純化及與GR相互作用的功能展開,CHRONO作為生物鐘新發(fā)現(xiàn)的核心元件,既在生物鐘的核心振蕩網(wǎng)絡(luò)中占有重要部分,又與核心生物鐘元件CRY有類似的功能,但是CHRONO功能還沒有被清楚闡明。鑒于蛋白結(jié)構(gòu)可以促進(jìn)了解相應(yīng)的功能,通過閱讀文獻(xiàn)及實驗室前期工作,開始對CHRONO結(jié)構(gòu)的初步研究。實驗主要是通過構(gòu)建載體導(dǎo)入大腸桿菌中表達(dá)蛋白,并對目的蛋白的生理特性進(jìn)行表征測定,為后期結(jié)構(gòu)的研究奠定基礎(chǔ)。首先對CHRONO蛋白,CHRONO的N端和C端的融合片段(CHRNC蛋白),CHRONO的helix區(qū)域(CHRH蛋白)進(jìn)行探索,了解CHRONO蛋白的生理特性及存在狀態(tài)。實驗同時選擇V29H和V28H骨架載體構(gòu)建了CHRHC(111-298)片段(CHR與BMAL1相互作用的區(qū)域)的系列延長截短體,構(gòu)建成功后進(jìn)行表達(dá)與純化。通過鎳柱純化得到14個V28H-CHRHC目的蛋白,蛋白量可觀且純度較好。將純化的蛋白經(jīng)分子篩純化,并通過蛋白標(biāo)定實驗測定蛋白聚體狀態(tài),結(jié)果表明V28H-CHR...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1晝夜節(jié)律系統(tǒng)的組織

安徽大學(xué)碩士學(xué)位論文1第一章背景介紹1.1生物鐘1.1.1生物鐘背景生物鐘（biologicalclock）是生物體在長期進(jìn)化過程中形成的一種能與自然環(huán)境相適應(yīng)接近24h周期變化的一種生理機制。生物鐘參與生命體的多種生理活動，例如夜行動物的覓食，絲狀真菌開始產(chǎn)生孢子，藍(lán)藻經(jīng)過光合....

圖1.2哺乳動物晝夜節(jié)律模型

第一章背景介紹21.1.2生物鐘的分子機制生物鐘的分子機制是一個復(fù)雜的反饋回路（圖1.2），主要包括Clock，Bmal1，Per1，Per2，Cry1，Cry2，Csnk1e，Csnk1d，Rev-erbα，Rorγ，F(xiàn)bxl3等基因和它們轉(zhuǎn)錄翻譯的產(chǎn)物，這個分子機制的中心由B....

圖1.3GM129在調(diào)節(jié)BMAL1-CLOCK活性中的作用的模型

褂蜃?家蜃覦bp、Hlf和Tef[55]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)了一個基因Gm129，它編碼一種未曾被報道的蛋白質(zhì)，在哺乳動物中非常保守，由375個氨基酸組成，分子量約為45kDa。GM129與核心時鐘蛋白BMAL1和PER2有相互作用，定位于細(xì)胞核，GM129蛋白與BMAL1-CLO....

圖3.1CHR蛋白一級結(jié)構(gòu)

第三章CHRHONO及CHRH蛋白的純化和狀態(tài)分析18第三章CHRONO及CHRH蛋白的純化和狀態(tài)分析3.1引言前期研究表明CHRONO蛋白無同源性結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)與功能部分尚不明確，了解CHRONO蛋白特征對研究其二級和三級結(jié)構(gòu)是必要的。首先設(shè)計實驗進(jìn)行CHRONO蛋白的純化及生理....

本文編號：4013079