發(fā)布時(shí)間：2024-11-30 21:50

　　 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將百脈根花對(duì)稱性基因Lj CYC1轉(zhuǎn)入非洲紫羅蘭,進(jìn)一步探討其作用和功能。非洲紫羅蘭LjCYC1轉(zhuǎn)化植株的表型發(fā)生以下變化:(1)花的對(duì)稱性明顯改變,由輻射對(duì)稱變?yōu)閮蓚?cè)對(duì)稱,出現(xiàn)頻率為14.3%;(2)花瓣向花冠基部裂開,且花瓣數(shù)減少,出現(xiàn)頻率為57.1%;(3)部分或全部雄蕊花瓣化,出現(xiàn)頻率為17.1%;(4)雌蕊花瓣化或退化,出現(xiàn)頻率為11.4%。

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【部分圖文】：

圖1 LjCYC1轉(zhuǎn)化非洲紫羅蘭的過(guò)程

經(jīng)農(nóng)桿菌侵染后的非洲紫羅蘭葉片共培養(yǎng)后，在溫度為（23±2）℃、12h/12h黑暗的培養(yǎng)條件下經(jīng)過(guò)1周延遲篩選后，轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基，30d后開始有抗性芽形成。將抗性芽轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，待小苗長(zhǎng)至2cm時(shí)切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，長(zhǎng)出根系后移栽到花盆（圖1）。2.3轉(zhuǎn)基因植株....

圖2 熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)基因非洲紫羅蘭的根細(xì)胞

取轉(zhuǎn)LjCYC1非洲紫羅蘭再生植株的根制成壓片，用蔡氏熒光顯微鏡觀察，在藍(lán)光激發(fā)下可清楚地觀察到根的細(xì)胞核發(fā)出綠色熒光，而野生型的根沒(méi)有這種現(xiàn)象（圖2），這表明GFP已經(jīng)在轉(zhuǎn)基因植株中高效表達(dá)。2.4轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)

圖4 LjCYC1在非洲紫羅蘭不同器官表達(dá)的RT-PCR分析

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果（圖4）顯示，外源LjCYC1在轉(zhuǎn)基因非洲紫羅蘭根、葉、花序梗、花萼、花瓣、雄蕊、雌蕊都高效表達(dá)，各組織中的表達(dá)量大致相同；營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的葉中表達(dá)量高于生殖生長(zhǎng)時(shí)期各個(gè)組織中的。2.6轉(zhuǎn)基因植株的表型

圖5 LjCYC1轉(zhuǎn)化非洲紫羅蘭雄蕊、雌蕊的變化

在花4輪結(jié)構(gòu)中表型變化最明顯的是2、3輪，其出現(xiàn)頻率達(dá)到70%以上。這些變化表明LjCYC1影響了非洲紫羅蘭花的表型，使花4輪結(jié)構(gòu)都有不同程度的改變。圖6LjCYC1轉(zhuǎn)化非洲紫羅蘭萼片的變化

本文編號(hào)：4013063