研究背景及目的目前臨床治療缺血性心臟病（IHD）的方法主要是常規(guī)藥物治療和血運(yùn)重建治療（經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療、冠脈搭橋術(shù)等）。然而,即使接受藥物或血運(yùn)重建治療的患者仍會(huì)出現(xiàn)反復(fù)心絞痛或心力衰竭等癥狀,而基因療法在增加側(cè)支血管生長(zhǎng),減少心肌缺血方面顯示出較大潛力,是IHD治療的希望。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF165）已被證明在心肌梗死后能發(fā)揮抗心肌細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)干細(xì)胞參與缺血心肌的修復(fù)以及提高心電穩(wěn)定性等作用。因此,本研究選擇VEGF165作為IHD基因治療的靶基因。在基因載體的選擇上,腺相關(guān)病毒（AAV）,因?yàn)槊庖咴缘�、安全性高、組織特異性好、宿主范圍廣以及可介導(dǎo)外源基因長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點(diǎn),從幾種病毒載體中脫穎而出,成為IHD最有前景的基因治療載體。本研究中,我們選定具有心肌嗜性的血清型AAV9,聯(lián)合心肌特異性的c Tn T啟動(dòng)子來介導(dǎo)VEGF165基因在心肌的長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá),以發(fā)揮持久有效的心肌保護(hù)作用。同時(shí),重組腺相關(guān)病毒（rAAV）的規(guī)模化包裝和純化是制約rAAV藥物研究快速發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵問題,存在著生產(chǎn)成本高、操作復(fù)雜、成品純度差、回收率低以及空殼病毒較多等諸多問題。所以,本研究...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1AAV的基因結(jié)構(gòu)

前言2輔助下才能發(fā)生產(chǎn)毒性感染，生成子代AAV。AAV的基因組是長(zhǎng)約4.7kb的單鏈DNA分子（圖1.1），基因組包含兩個(gè)開放閱讀框（ORF）——Rep基因和Cap基因，以及兩端約145bp的反向末端重復(fù)序列（Invertedterminalrepeats，ITRs）。Rep基因....

圖2.1重組腺相關(guān)病毒rAAV9-cTnT-VEGF165-eGFP的制備與純化技術(shù)路線

材料與方法192.2.實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖2.1重組腺相關(guān)病毒rAAV9-cTnT-VEGF165-eGFP的制備與純化技術(shù)路線2.3.實(shí)驗(yàn)方法2.3.1.VEGF165基因序列的獲取1）登錄NCBI網(wǎng)站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/），在“Nucleot....

圖2.1載體質(zhì)粒pAAV-cTnT-eGFP的質(zhì)粒圖譜

材料與方法201)上游引物的選取：直接選擇從起始密碼子起，隨后約20bp長(zhǎng)度左右的一段序列作為初步設(shè)定的上游引物。隨后通過增加或減少單個(gè)堿基，不斷調(diào)整引物序列長(zhǎng)度，使其盡可能滿足引物設(shè)計(jì)原則中Tm值、GC含量等要求，進(jìn)而確定上游引物的序列。2)下游引物的選取：選擇從終止密碼子端起....

圖3.1VEGF165基因的PCR擴(kuò)增

結(jié)果與分析38圖3.1VEGF165基因的PCR擴(kuò)增M：TaKaRa公司的DL2000marker；泳道1,2：均為VEGF165基因的PCR產(chǎn)物。3.4.載體質(zhì)粒pAAV-cTnT-eGFP-VEGF165的構(gòu)建及鑒定1）分別將提取的VEGF165基因和pAAV-cTnT-eG....

本文編號(hào)：4008077