目的利用活細胞顯微成像術對腦微血管內皮細胞內肌動蛋白的動態(tài)變化實現實時觀察。方法構建綠色熒光蛋白(GFP)標記Lifeact的真核表達載體即Lifeact-pEGFP,利用脂質體轉染法將Lifeact-pEGFP質粒轉染至腦微血管內皮細胞中,利用共聚焦激光掃描顯微鏡對Lifeact-pEGFP在細胞內的分布進行分析,并檢測其在細胞伸展和遷移過程中的動態(tài)變化。結果成功將Lifeact-p EGFP質粒轉染至人腦微血管內皮細胞,細胞存活未受到影響。Lifeact-pEGFP能將活細胞中的肌動蛋白絲標記為綠色熒光,并能夠有效監(jiān)測細胞伸展和遷移過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化。結論 Lifeact-p EGFP轉染結合活細胞顯微成像術可以用于實時記錄和分析腦微血管內皮細胞內肌動蛋白絲的動態(tài)變化。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞：
        1.1.2 主要試劑：
    1.2 方法
        1.2.1 質粒構建和鑒定：
        1.2.2 細胞培養(yǎng)：
        1.2.3 細胞轉染：
        1.2.4 細胞增殖實驗：
        1.2.5 免疫熒光染色：
        1.2.6 細胞伸展實驗：
        1.2.7 細胞劃痕實驗：
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 Lifeact-pEGFP質粒的構建和鑒定
    2.2 Lifeact-pEGFP的表達不影響B(tài)MEC的存活
    2.3 BMEC中表達的Lifeact-pEGFP與肌動蛋白絲呈共定位
    2.4 Lifeact-pEGFP的表達可以顯示BMEC在伸展過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化
    2.5 Lifeact-pEGFP能夠標記運動細胞前導緣肌動蛋白絲的動態(tài)變化
3 討論



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