目的利用活細(xì)胞顯微成像術(shù)對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白的動態(tài)變化實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)觀察。方法構(gòu)建綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記Lifeact的真核表達(dá)載體即Lifeact-pEGFP,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將Lifeact-pEGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中,利用共聚焦激光掃描顯微鏡對Lifeact-pEGFP在細(xì)胞內(nèi)的分布進(jìn)行分析,并檢測其在細(xì)胞伸展和遷移過程中的動態(tài)變化。結(jié)果成功將Lifeact-p EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,細(xì)胞存活未受到影響。Lifeact-pEGFP能將活細(xì)胞中的肌動蛋白絲標(biāo)記為綠色熒光,并能夠有效監(jiān)測細(xì)胞伸展和遷移過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化。結(jié)論 Lifeact-p EGFP轉(zhuǎn)染結(jié)合活細(xì)胞顯微成像術(shù)可以用于實(shí)時(shí)記錄和分析腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白絲的動態(tài)變化。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞：
        1.1.2 主要試劑：
    1.2 方法
        1.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建和鑒定：
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)：
        1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
        1.2.4 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：
        1.2.5 免疫熒光染色：
        1.2.6 細(xì)胞伸展實(shí)驗(yàn)：
        1.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)：
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 Lifeact-pEGFP質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
    2.2 Lifeact-pEGFP的表達(dá)不影響B(tài)MEC的存活
    2.3 BMEC中表達(dá)的Lifeact-pEGFP與肌動蛋白絲呈共定位
    2.4 Lifeact-pEGFP的表達(dá)可以顯示BMEC在伸展過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化
    2.5 Lifeact-pEGFP能夠標(biāo)記運(yùn)動細(xì)胞前導(dǎo)緣肌動蛋白絲的動態(tài)變化
3 討論



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