內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)對(duì)細(xì)胞應(yīng)激(包括代謝不平衡和/或蛋白質(zhì)折疊不平衡)有很好的感覺(jué)和反應(yīng)。對(duì)于第一個(gè)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的受體,PERK與其他近端信號(hào)分子一起啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)程序,稱為未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)。持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的結(jié)果是活性氧物質(zhì)的積累,以至于促進(jìn)氧化應(yīng)激狀態(tài)。PERK信號(hào)通過(guò)激活核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子2(NRF2)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子4(ATF4)來(lái)連接ER應(yīng)激反應(yīng)與氧化應(yīng)激信號(hào)。NRF2同屬于CNC家族,在其C-端含有一個(gè)典型的BRLZ結(jié)構(gòu)域,并能通過(guò)調(diào)節(jié)下游靶基因血紅素加氧酶1(HO-1)來(lái)減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度。為了研究草魚(yú)NRF2基因在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用,我們重新克隆并鑒定了草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)NRF2的開(kāi)放閱讀框(ORF),發(fā)現(xiàn)這條ORF(1782bp)是能夠編碼593個(gè)氨基酸的多肽并且包含了一個(gè)保守的bZIP結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示草魚(yú)NRF2與其它魚(yú)類的NRF2在進(jìn)化上有著更為密切的關(guān)系。不同時(shí)間段TM(衣霉素)刺激CIK細(xì)胞后,RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CiNRF2 mRNA水平明顯上調(diào)。以CiBIP為靶標(biāo),過(guò)表達(dá)CiNRF2后CiBIP mRNA明顯下...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2NRF2/ATF4-HO-1信號(hào)通路模式圖

第一章前言為PERK磷酸化eIF2α的下游基因來(lái)調(diào)控CHOP基因的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了ATF4可以作為NRF2的一個(gè)結(jié)合蛋白存在，形成的異源二聚體在應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[73]。當(dāng)細(xì)胞處于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)，PERK與分子伴侶GRP78....

圖3，1草魚(yú)N田田2基因CDSF運(yùn)‘3.ICDgofCIN衛(wèi)FZge們e

第三章結(jié)果與分析第三章結(jié)果與分析克隆及其分析放閱讀框（CDS）的克隆AGI93118.1）序列設(shè)計(jì)同源引物NRF2因部分同源片段。測(cè)序后用NCBI的似度，確定為草魚(yú)NRF2基因。經(jīng)過(guò)閱讀框（圖3.1）。

圖3.2草魚(yú)NRF2序列分析

結(jié)果顯示CiNRF2的經(jīng)典BRLZ（bZIP）結(jié)構(gòu)域（483-547aa）位于近C端(圖3.2B)。A1ATGATGGAGATTGAATTGCCTAAAATGCACCCAAGCCAACAGGATATGGAGCTGATAGAT1MMEIELPKMH....

圖3.3草魚(yú)NRF2系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

3.3TM上調(diào)草魚(yú)NRF2表達(dá)分析草魚(yú)腎細(xì)胞（CIK）經(jīng)過(guò)不同時(shí)間段的衣霉素（TM）刺激后，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)草魚(yú)NRF2基因的mRNA表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果如圖3.5所示。TM會(huì)上調(diào)草魚(yú)NRF2的表達(dá)，并且圖中可以看出在4h開(kāi)始上調(diào)，至36h達(dá)到最高....

本文編號(hào)：3989029