為了深入研究干酪乳桿菌Zhang在抗生素環(huán)境中適應性進化機制,構(gòu)建yha I基因敲除體系,并對突變體的耐藥表型進行研究。運用PCR技術(shù)分別擴增yha I基因的同源臂序列,構(gòu)建帶有內(nèi)部缺失yha I基因的敲除載體。采用Cre/lox基因重組系統(tǒng),篩選雙交換子L.casei Zhang-G-1200-yha I::lox66-P32-cat-lox71,構(gòu)建突變株L.casei Zhang-G-1200-Che yhaChe I,通過稀釋法研究突變株的耐藥表型。通過PCR和PCR產(chǎn)物經(jīng)測序驗證,yha I基因缺陷的菌株構(gòu)建成功。耐藥表型結(jié)果表明,突變株在慶大霉素濃度為8和16μg/m L時,濁度變?yōu)樵季甑?/2;在慶大霉素濃度為16μg/m L時,活菌數(shù)變?yōu)樵季甑?/10。成功構(gòu)建干酪乳桿菌Zhang的基因敲除體系,為研究干酪乳桿菌Zhang的基因功能提供了技術(shù)平臺。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 乳酸菌和大腸桿菌的培養(yǎng)條件
        1.2.2 目的基因同源臂擴增及敲除載體的構(gòu)建
            1.2.2. 1 目的基因同源臂擴增
            1.2.2. 2 敲除載體pNZ5319-yha IUp-Down的構(gòu)建和克隆
        1.2.3 乳酸菌感受態(tài)的制備和敲除載體的電轉(zhuǎn)化
            1.2.3. 1 乳酸菌感受態(tài)的制備
            1.2.3. 2 敲除載體的電轉(zhuǎn)化
        1.2.4 雙交換子L.casei Zhang-G-1200-yha I::lox66-P32-cat-lox71的篩選
        1.2.5 突變株L.casei Zhang-G-1200-yha I的構(gòu)建
        1.2.6 突變株L.casei Zhang-G-1200-yha I耐藥表型分析
    1.3 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 敲除載體p NZ5319-yha I Up-Down的構(gòu)建
    2.2 基因敲除載體的電轉(zhuǎn)化
    2.3 突變株L.casei Zhang-G-1200-yha I的構(gòu)建
    2.4 突變株L.casei Zhang-G-1200-yha I的耐藥表型的分析
3 討論與結(jié)論



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