哺乳動(dòng)物精子發(fā)生是一個(gè)非常復(fù)雜且連續(xù)的過(guò)程,主要包括以下三個(gè)階段:1.精原干細(xì)胞的自我更新與分化;2.精母細(xì)胞的減數(shù)分裂;3.精細(xì)胞的變形與成熟。精子發(fā)生正常有序的進(jìn)行離不開(kāi)很多基因的精確調(diào)控,這其中就包括一系列負(fù)責(zé)對(duì)DNA損傷進(jìn)行修復(fù)的基因。因?yàn)榫邮歉阜竭z傳物質(zhì)的載體,確保其基因組的完整性對(duì)于維持物種后代的穩(wěn)定至關(guān)重要。在體細(xì)胞中,BRCA1(Breast cancer 1,early onset)是一個(gè)參與DNA雙鏈斷裂(Double-strand break,DSB)修復(fù)的關(guān)鍵蛋白。正是因?yàn)槿绱?BRCA1被廣泛認(rèn)為是一個(gè)抑癌基因,它主要通過(guò)參與一種非常精確的DNA損傷修復(fù)方式-同源重組修復(fù)(Homologous recombination repair,HR)來(lái)發(fā)揮其抑癌作用。以前的研究利用Brca1突變小鼠發(fā)現(xiàn),在精母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂前期的粗線期,BRCA1會(huì)被募集到性染色體的未聯(lián)會(huì)的軸上并介導(dǎo)減數(shù)分裂性染色體沉默(Meiotic Sex Chromosome Inactivation,MSCI)。但是,在他們所使用的Brca1突變小鼠中BRCA1蛋白并沒(méi)有被完全敲除,其...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖3.1生殖細(xì)胞特異性Brca1敲除小鼠的產(chǎn)生以及BRCA1野生型、Δ11和Δ5-13蛋白比較分析。

我們選取了出生后第5天(Postnatalday5,P5)的Brca1flox5-13/-;Vasa-Cre雄鼠的睪丸為實(shí)驗(yàn)材料,提取其總mRNA然后反轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后將敲除第5-13號(hào)外顯子的Brca1基因全長(zhǎng)用PCR擴(kuò)增出來(lái),進(jìn)行測(cè)序。我們發(fā)現(xiàn),如圖3.1C,敲除....

圖3.2生殖細(xì)胞特異性Brca1完全敲除的雄鼠不育,雌鼠可育。出生后第90天(P90)的成年對(duì)照組小鼠和Brca1flox5-13/-;Vasa-Cre(Brca1vKO)小鼠附睪和卵巢的石蠟切片H&E染色圖片。標(biāo)尺,50μm.

3.2生殖細(xì)胞特異性Brca1敲除導(dǎo)致雄鼠不育,對(duì)雌鼠的生育沒(méi)有影響為了探究Brca1完全敲除對(duì)小鼠生殖力的影響,我們選取了成年(出生后第90天,P90)的Brca1vKO雄鼠的附睪和雌鼠的卵巢分別制作了石蠟切片,并進(jìn)行了H&E染色。Brca1vKO的小鼠發(fā)育正常,外觀....

圖3.3成年Brca1生殖細(xì)胞特異性敲除雄鼠的睪丸明顯變小,生殖細(xì)胞發(fā)育異常。

對(duì)睪丸支持細(xì)胞的標(biāo)志-SOX9的免疫熒光染色顯示,Brca1生殖細(xì)胞特異性敲除對(duì)雄鼠睪丸支持細(xì)胞的發(fā)育沒(méi)有明顯的影響(圖3.3E)。3.4出生后第21天的Brca1生殖細(xì)胞特異性敲除雄鼠的睪丸明顯變小,睪丸內(nèi)生殖細(xì)胞也大量減少

圖3.4年輕Brca1生殖細(xì)胞特異性敲除雄鼠的睪丸明顯變小,生殖細(xì)胞發(fā)育出現(xiàn)阻滯。

同樣的,對(duì)睪丸支持細(xì)胞的標(biāo)志-SOX9的免疫熒光染色顯示,Brca1生殖細(xì)胞特異性敲除對(duì)年輕的雄鼠體內(nèi)睪丸支持細(xì)胞的發(fā)育沒(méi)有明顯的影響(圖3.4F)。3.5Brca1完全敲除導(dǎo)致精原細(xì)胞分化完全阻滯,減數(shù)分裂無(wú)法啟動(dòng)

本文編號(hào)：3959343