發(fā)布時間：2024-04-20 09:42

　　芍藥是乙烯敏感型花卉,乙烯受體感知并傳導(dǎo)乙烯信號,在乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮重要作用。芍藥PlETR1基因cDNA全長序列已分離,為了鑒定芍藥PlETR1基因的功能,本研究基于PlETR1基因和表達載體序列,應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計了一對特異性PCR引物,采用RT-PCR技術(shù)擴增出了PlETR1編碼區(qū)片段,進一步構(gòu)建了芍藥PlETR1基因過表達載體。基于優(yōu)化的模式植物煙草的組培體系和篩選出的潮霉素抗性濃度,應(yīng)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法開展了芍藥PlETR1基因轉(zhuǎn)化煙草的研究,對轉(zhuǎn)基因抗性煙草植株進行了PCR檢測,結(jié)果表明HPT基因和芍藥PlETR1基因已導(dǎo)入到煙草基因組中,且芍藥PlETR1基因轉(zhuǎn)錄表達成功,為下一步鑒定芍藥PlETR1基因的功能提供科學(xué)依據(jù)。

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【部分圖文】：

圖1PlETR1基因編碼區(qū)的PCR擴增及重組子的雙酶切鑒定

在潮霉素濃度為55mg/L時，對照組外植體徹底黃化且未有愈傷分化；處理組雖然有些微黃化，但是愈傷組織分化較多且不定芽誘導(dǎo)率高(表3)。因此確定基因轉(zhuǎn)化后的分化培養(yǎng)基為MS+0.2mg/L6-BA+2.0mg/LNAA+500mg/L頭孢霉素+55mg/L潮霉素。圖2....

圖2PlETR1基因過表達載體的構(gòu)建

圖1PlETR1基因編碼區(qū)的PCR擴增及重組子的雙酶切鑒定1.5煙草抗性植株的獲得

圖3抗性愈傷組織的產(chǎn)生

農(nóng)桿菌侵染過的煙草葉片在抗性培養(yǎng)基上分化產(chǎn)生愈傷組織，并且只在葉片邊緣產(chǎn)生愈傷組織；未被農(nóng)桿菌侵染過的葉片全部死亡(圖3)。取下葉片邊緣上產(chǎn)生的愈傷組織小點，將其接種到新的篩選分化培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)。待不定芽生長至5～6片葉片時(圖4A)，將其接種至生根培養(yǎng)基中，待根伸長到3～....

圖4煙草不定芽分化,根的誘導(dǎo)及馴化

圖3抗性愈傷組織的產(chǎn)生1.6PlETR1轉(zhuǎn)基因煙草植株的PCR鑒定

本文編號：3959229