目的確定重組泛素樣特異性蛋白酶1 (ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大腸桿菌中的最佳表達(dá)條件并進(jìn)行分離純化。方法采用DNA重組技術(shù),構(gòu)建重組質(zhì)粒Ulp1-p ET-28a,并轉(zhuǎn)化到Escherichia coli BL21 (DE3)細(xì)胞中,以IPTG誘導(dǎo)Ulp1原核表達(dá),并從誘導(dǎo)時(shí)間、誘導(dǎo)溫度和IPTG誘導(dǎo)濃度方面確定其最佳表達(dá)條件,再以親和層析法分離純化Ulp1。結(jié)果 SDS-PAGE分析表明,工程菌誘導(dǎo)溫度為30℃、誘導(dǎo)時(shí)間為6 h、IPTG濃度為0.2 mmol/L時(shí)Ulp1表達(dá)量最高,表達(dá)量約為350 mg/L且成功進(jìn)行了Ulp1的分離純化。結(jié)論本研究成功進(jìn)行了Ulp1原核表達(dá)條件的優(yōu)化與分離純化,為Ulp1在生物工程中的酶切應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 儀器與設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 Ulp1原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 Ulp1的原核表達(dá)
        1.2.3 Ulp1誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化
        1.2.4 Ulp1誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        1.2.5 IPTG誘導(dǎo)濃度的優(yōu)化
        1.2.6 飽和硫酸銨沉淀制備粗提液
        1.2.7 Ulp1分離純化與鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 Ulp1原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 Ulp1的原核表達(dá)
    2.3 確定Ulp1最佳誘導(dǎo)時(shí)間
    2.4 確定Ulp1最佳誘導(dǎo)溫度
    2.5 確定IPTG最佳誘導(dǎo)濃度
    2.6 Ulp1分離純化與鑒定
3 討論



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