發(fā)布時(shí)間：2024-03-17 14:11

　　CHOP(又稱DNA損傷誘導(dǎo)基因153(GADDl53)),作為生物體內(nèi)普遍存在的一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,是C/EBP家族成員之一,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中扮演著重要的作用。在本文中我們首先用同源基因克隆的方法克隆與鑒定了草魚CHOP基因的全長(zhǎng)cDNA序列(KX013389)及其啟動(dòng)子序列。CiCHOP cDNA全長(zhǎng)1520bp,包括1個(gè)246bp的5′非翻譯區(qū)、1個(gè)編碼248個(gè)氨基酸的747bp的開放閱讀框和1個(gè)527bp的3′非翻譯區(qū)。CHOP蛋白在各物種中高度保守,其核心結(jié)構(gòu)域均為“堿性亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域(BRLZ)”。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示,草魚CHOP與其他魚類分布在同一分支上具有較高的相似性,特別是與斑馬魚的進(jìn)化關(guān)系顯示最為接近。ATF4是細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的關(guān)鍵調(diào)控因子。RT-PCR結(jié)果顯示:不同濃度的衣霉素刺激均能誘導(dǎo)CiCHOP和CiATF4的表達(dá)上調(diào)。而隨著刺激時(shí)間的增加,他們的表達(dá)量也出現(xiàn)明顯上升并且表現(xiàn)出一致性,提示我們這兩者之間可能存在一定的相互作用關(guān)系。為了進(jìn)一步研究CHOP在外界刺激后的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,我們克隆了CiCHOP的啟動(dòng)子序列并且原核表達(dá)和純化了CiATF6...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.3CHOP的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖3.3CHOP的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig3.3PhylogenetictreeofCHOPproteinsequencesClustalX軟件對(duì)比24個(gè)物種中的蛋白序列，其中包括：山羊(NP_001274160.1),野豬(NP_001138317.1),家鼠(N....

圖3.4不同濃度衣霉素刺激后草魚細(xì)胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達(dá)分析

31圖3.4不同濃度衣霉素刺激后草魚細(xì)胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達(dá)分析Fig3.4QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草魚CIK細(xì)胞經(jīng)不同濃度衣霉素刺激后CHOP、ATF4基因的表達(dá)情況。以0μg....

圖3.5相同濃度衣霉素刺激不同時(shí)間后草魚細(xì)胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達(dá)分析

32圖3.5相同濃度衣霉素刺激不同時(shí)間后草魚細(xì)胞內(nèi)CHOP、ATF4的表達(dá)分析Fig3.5QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草魚CIK細(xì)胞經(jīng)相同濃度衣霉素刺激不同時(shí)間后CHOP、ATF4基因的表達(dá)情....

圖3.6草魚ATF4、ATF6與草魚CHOP啟動(dòng)子的親和性分析

圖3.6草魚ATF4、ATF6與草魚CHOP啟動(dòng)子的親和性分析Fig3.6AffinityanalysisofCiATF4andCiATF6WithCiCHOPpromoters（A）凝膠阻滯分析草魚ATF4與草魚CHOP啟動(dòng)子（CiCHO....

本文編號(hào)：3931147