硫酸軟骨素酶(ChS ase)是一類(lèi)能將硫酸軟骨素(CS)催化裂解為小分子多糖的酶,根據(jù)結(jié)合的底物種類(lèi)可分為ChSase ABC,ChSase AC,ChSase B和ChSase C。將普通變形桿菌(Proteus vulgaris)KCTC 2579的硫酸軟骨素酶ABC (IChSase ABCⅠ)與麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)融合表達(dá),構(gòu)建了pMAL-c2x-ChSase ABCⅠ重組載體,并成功在大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)宿主中高效表達(dá)。將麥芽糖結(jié)合蛋白-硫酸軟骨素酶(MBP-ChSase)ABCⅠ固定在聚苯胺載體上,制備生物傳感器,并利用循環(huán)伏安法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,MBP-ChSase ABCⅠ酶活和比酶活分別為3 180 IU/L發(fā)酵液和76 IU/mg蛋白。選擇硫酸軟骨素A(CS A)作為酶的反應(yīng)底物,在最適反應(yīng)條件下,反應(yīng)的峰值電流與CS A在濃度0.1 nmol/L～0.1μmol/L范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。該生物傳感器對(duì)底物反應(yīng)迅速,具有較高的靈敏度,可以進(jìn)行有效檢測(cè)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 儀器與設(shè)備
    1.3 方法
        1.3.1 重組質(zhì)粒p MAL-c2x-Ch Sase ABC I的構(gòu)建
        1.3.2 重組酶MBP-Ch Sase ABC I的表達(dá)和宿主優(yōu)化
        1.3.3 重組酶MBP-Ch Sase ABC I的SDS-PAGE分析
        1.3.4 酶活及比酶活的測(cè)定
        1.3.5 酶的固定化
        1.3.6 MBP-Ch Sase ABC I生物傳感器電化學(xué)性能檢測(cè)
        1.3.7 底物硫酸軟骨素A對(duì)傳感器的影響
        1.3.8 生物傳感器靈敏度測(cè)定
2 結(jié)果與分析
    2.1 PCR結(jié)果驗(yàn)證及序列分析
    2.2 重組酶MBP-Ch Sase ABC I的表達(dá)及宿主優(yōu)化
    2.3 循環(huán)伏安圖
    2.4 底物CS A濃度對(duì)生物傳感器的影響
    2.5 生物傳感器靈敏度
3 討論
4 結(jié)論



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