G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors,GPCRs)主要負責介導細胞內(nèi)外跨膜信號轉(zhuǎn)導功能,是重要的藥物靶點.β-arrestin作為GPCRs行使功能的重要途徑之一,其對調(diào)節(jié)GPCRs信號轉(zhuǎn)導過程有重要意義.但目前對于β-arrestin如何與GPCRs相互作用并調(diào)控其信號轉(zhuǎn)導功能尚不十分清楚.本文以趨化因子受體3 (CC chemokine receptor 3,CCR3)為研究對象,構(gòu)建了β-arrestin與CCR3的共表達體系,利用激光共聚焦熒光成像與熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技術(shù)研究了β-arrestin與CCR3在活細胞水平的相互作用,利用RNAi和趨化實驗考察了β-arrestin對CCR3穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞趨化行為的調(diào)控作用,并在體外利用石英晶體微天平(quartz crystal microbalance,QCM)技術(shù)測定了β-arrestin突變體(R169E)與CCR3之間結(jié)合常數(shù).結(jié)果顯示,趨化因子CCL11 (chemokine C-C motif ligan...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及β-arrestin si RNA的合成
        1.2.2 β-arrestin蛋白與CCR3的免疫熒光成像
        1.2.3 熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測（FRET)
        1.2.4 β-arrestin定位分析
        1.2.5 β-arrestinsi RNA干擾效率及其對CCR3蛋白表達的影響
        1.2.6 β-arrestin沉默對CCR3受體趨化作用的影響
        1.2.7 β-arrestin與CCR3的體外結(jié)合試驗
2 結(jié)果
    2.1 β-arrestin與CCR3共表達免疫熒光成像
    2.2 β-arrestin轉(zhuǎn)位實驗
    2.3 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)檢測β-arrestin與CCR3相互作用
    2.4 si RNA干擾對CCR3蛋白表達量的影響
    2.5 CCR3穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞趨化實驗
    2.6 β-arrestin與CCR3體外相互作用表征
3 討論



本文編號：3919199