干擾素是在干擾素誘導(dǎo)劑作用下誘導(dǎo)特定的細胞產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤及調(diào)節(jié)免疫等作用的一類高活性、多功能糖蛋白。干擾素具有高度種屬特異性,既可以抑制多種RNA病毒,又可以抑制多種DNA病毒。牛干擾素根據(jù)其作用類型分為I型干擾素和II型干擾素兩種類型,其中I型干擾素主要分為α、β、ω、ε和τ五種亞型,II型干擾素主要有γ干擾素。BoIFN-α主要具有抗病毒的功能,在干擾素中,它的抗病毒能力是最強的,對動物病毒性疾病產(chǎn)生很好的治療和防治作用。因此研究牛干擾素對動物病毒性疾病的防治具有重大意義。本實驗成功構(gòu)建了四種表達載體:(1)本實驗成功克隆牛干擾素基因,并連接到pET-28a載體上,經(jīng)測序,結(jié)果完全正確。(2)為提高蛋白表達量,在不改變干擾素氨基酸序列的前提下,利用大腸桿菌對密碼子的偏好性,對干擾素序列進行優(yōu)化,并連接到pET-28a載體上。(3)為提高蛋白表達量,在pET-28a-BoIFN-α-t上串聯(lián)表達元件,經(jīng)測序表達元件已成功連接到pET-28a-BoIFN-α上。(4)為提高蛋白可溶性表達,將BoIFN-α基因連接到低溫表達載體表達載體pET-28a-sumo上,經(jīng)測序,結(jié)果完...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖2-1BoIFN-α高保真PCR結(jié)果

同2.3.2中的（6）。列BoIFN-α原核表達載體的構(gòu)建菌對密碼子的偏好性，在不改變BoIFN-α氨基酸優(yōu)化，并連接到pET-28a載體上，優(yōu)化過程及AN軟件將原序列與優(yōu)化后序列進行序列比對增BoIFN-α的產(chǎn)物分析進行膠回收跑膠鑒定后，電泳結(jié)果顯示獲得與....

圖2-3重組質(zhì)粒pET-28a-BoIFN-α雙酶切的鑒定

圖2-2pET-28a-BoIFN-α菌落PCRNAMarker，1-9：pET-28a-BoIFN-α，10：pET-28a-BoIFN-α雙酶切的鑒正確的陽性菌落提取質(zhì)粒后，進行雙酶基因及pET-28a條帶大小一致的的電2-3）。并且送至公司的質(zhì)粒顯示測序完全....

圖2-4重組質(zhì)粒pET-28a-BoIFN-α測序序列比對2.5.5PCR擴增BoIFN-α-t的產(chǎn)物分析

2.5.4重組質(zhì)粒pET-28a-BoIFN-α測序?qū)㈦p酶切鑒定正確的質(zhì)粒送公司測序，序列對比后發(fā)現(xiàn)結(jié)果完全正確，結(jié)果如圖2-4：

圖2-5BoIFN-α-t高保真PCR結(jié)果

圖2-5BoIFN-α-t高保真PCR結(jié)果（A）M：DL2000DNAMarker，1-2：加第一段轉(zhuǎn)錄終止序列（B）M：DL2000DNAMarker，1-2：加第一段轉(zhuǎn)錄終止序列2.5.6pET-28a–BoIFN-α-t陽性菌落的鑒定將連接體系轉(zhuǎn)化至....

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